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番木瓜环斑病毒（PRSV）ci和nib反向重复结构表达载体的转化研究

作　者: 胡恒
导　师: 姜玲
学　校: 华中农业大学
专　业: 果树学
关键词: 番木瓜环斑病毒反向重复表达载体原生质体遗传转化 ci基因 nib基因
分类号: S436.67
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 38次
引　用: 1次
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内容摘要

番木瓜环斑病毒病是番木瓜的第一大病毒性病害,在世界范围内造成较大危害,目前还没有十分有效的化学药剂能控制PRSV病害,只能采取以栽培措施为主的综合防治措施。植物基因工程的快速发展为植物抗病提供了一条崭新而有效的方法,尤其是近年来RNAi领域研究的快速发展,利用反向重复表达载体对植物进行遗传转化成为研究植物抗病毒研究的一大热点。本研究以番木瓜胚状体、黄瓜子叶节作为转化材料,利用农杆菌介导法将反向重复表达载体pHellsgate-CIIR、pHellsgate-NIbIR导入到受体材料中,期望得到转基因植株。同时利用原生质体瞬时表达体系初步研究了反向重复表达载体对目标基因的沉默效果。主要研究结果如下：(1)对番木瓜下胚轴、叶柄、幼胚以及番木瓜愈伤组织进行胚状体诱导,仅从幼胚和愈伤组织上得到了番木瓜胚状体,其中以幼胚诱导产生的胚状体数量多,耗时短,40d左右即能从幼胚中诱导出胚状体,诱导率为20%。(2)以黄瓜子叶节为外植体建立了黄瓜再生体系,使用含有表达载体pHellsgate-CIIR、pHellsgate-NibIR的农杆菌侵染黄瓜子叶节,通过抗生素筛选,得到了黄瓜转化苗。(3)用PRSV病毒粒子与反向重复表达载体pHellsgate-CIIR共转化番木瓜原生质体,12、24、36、48h分别取样,经原生质体总RNA提取、RT-PCR检测,结果显示,对于只转化PRSV的原生质体,24h开始能够检测到病毒ci基因的表达,且随着时间延长,ci基因的表达量逐渐增多；对于PRSV与反向重复表达载体pHellsgate-CIIR共转化的番木瓜原生质体,没有检测到病毒ci基因的表达,说明重复表达载体pHellsgate-CIIR的产物能够抑制ci基因的表达。

番木瓜环斑病毒（PRSV）ci和nib反向重复结构表达载体的转化研究

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