学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

电穿孔介导的kallistatin基因表达及对小鼠IBD模型的预防治疗作用

作 者: 熊真珍
导 师: 刁勇
学 校: 华侨大学
专 业: 高分子化学与物理
关键词: IBD Kallistatin 电穿孔 基因治疗
分类号: S858.91
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
下 载: 24次
引 用: 0次
阅 读: 论文下载
 

内容摘要


炎症性肠病(IBD)是一种天然免疫性疾病。目前其发病机理尚不明确,临床上尚无有效的治疗药物。Kallistatin(Kal)是一种血管生成抑制剂和肝素结合蛋白,其在生理和病理反应中有多种作用,如抗炎、抗血管生成等,被认为是肠炎、关节炎、损伤修复的候选药物。本实验首先通过对两种质粒的酶切鉴定,X-gal染色法和细胞免疫荧光法验证了pAAV-LacZ质粒和pAAV-Kal质粒,及对细胞转染鉴定了Kal可在细胞内表达。并利用电穿孔法将基因导入昆明小鼠体内,比较其与非电穿孔法介导的基因表达差异。同时检测电穿孔介导的Kal在不同转染浓度、不同时间的表达情况,并绘制不同转染浓度下的表达曲线。使用电穿孔法介导Kal对三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的小鼠IBD模型进行基因预防治疗,通过检测小鼠的体重变化、存活率、以及病理切片分析Kal对其治疗效果。并通过组织免疫荧光法初步探讨Kal在小鼠结肠炎中的抗炎机制。研究结果显示电穿孔介导Kal基因表达可以剂量依赖性的降低IBD模型的炎症反应。结肠病理切片分析显示,Kal可以降低单核细胞的侵袭,同时利用免疫荧光发现Kal多集中于炎症区,我们推测这可能说明Kal可靶向单核细胞或肠上皮细胞。因此,我们认为电穿孔法是一种有效的基因传递方法,Kal可以作为治疗IBD的基因药物。

全文目录


摘要  4-5
Abstract  5-9
第一章 引言  9-27
  1.1 Kallistatin 的研究进展  9-17
    1.1.1 Kallistatin 的特性及结构活性关系  9-10
    1.1.2 Kallistatin 的分布及调节  10-11
    1.1.3 Kallistatin 的功能  11-16
    1.1.4 总结及展望  16-17
  1.2 炎症性肠病机制研究进展  17-22
    1.2.1 肠道微生物的“两面性”  17-18
    1.2.2 保持肠道内平衡路径的研究  18-19
    1.2.3 炎性体研究(Inflammsome)  19-20
    1.2.4 NOD2 的研究  20-21
    1.2.5 天然免疫、结肠炎和组织修复  21-22
  1.3 活体电穿孔的研究进展  22-27
    1.3.1 活体电穿孔的的原理和特点  22-23
    1.3.2 影响活体电穿孔效率的因素  23-24
    1.3.3 活体电穿孔在不同组织上的应用  24-25
    1.3.4 活体电穿孔与核酸免疫  25
    1.3.5 活体电穿孔与基因治疗  25-26
    1.3.6 展望  26-27
第二章 pAAV-Kal 及pAAV-LacZ质粒的细胞内表达  27-36
  2.1 实验材料、试剂与仪器  27-28
    2.1.1 实验材料  27
    2.1.2 实验试剂  27
    2.1.3 主要实验仪器  27-28
  2.2 实验方法  28-34
    2.2.1 主要试剂配制  28-29
    2.2.2 pAAV-Kal 及pAAV-LacZ 质粒的转化及鉴定  29-31
    2.2.3 质粒的大量提取、纯化及浓度测定  31-32
    2.2.4 细胞培养  32-33
    2.2.5 质粒表达鉴定  33-34
  2.3 实验结果与分析  34-36
    2.3.1 pAAV-LacZ 及pAAV-Kal 酶切鉴定  34
    2.3.2 pAAV-LacZ 及pAAV-Kal 在细胞内表达  34-35
    2.3.3 小结  35-36
第三章 电穿孔介导pAAV-Kal 及pAAV-LacZ质粒在小鼠体内的表达  36-50
  3.1 实验材料、试剂与仪器  36-37
    3.1.1 实验材料  36
    3.1.2 实验试剂  36
    3.1.3 主要实验仪器  36-37
  3.2 实验方法  37-44
    3.2.1 主要试剂配制  37
    3.2.2 活体电穿孔法介导LacZ 质粒在小鼠体内的表达  37-41
    3.2.3 活体电穿孔法转导pAAV-Kal 质粒在小鼠体内的表达  41-44
    3.2.4 实验数据分析  44
  3.3 实验结果及分析  44-49
    3.3.1 活体电穿孔法介导LacZ 质粒在小鼠体内的表达  44-46
    3.3.2 活体电穿孔法介导pAAV-Kal 质粒在小鼠体内的表达  46-49
  3.4 讨论  49-50
第四章 Kal 对小鼠结肠炎的预防治疗作用  50-56
  4.1 实验材料、试剂与仪器  50
    4.1.1 实验材料及仪器  50
    4.1.2 实验试剂  50
  4.2 实验方法  50-52
    4.2.1 主要试剂配制  50
    4.2.2 动物模型建立及给药  50-51
    4.2.3 Kal 对肠炎小鼠预防作用  51
    4.2.4 数据分析  51-52
  4.3 实验结果与分析  52-55
    4.3.1 小鼠体重变化及死亡率  52-53
    4.3.2 模型小鼠结肠长度变化  53
    4.3.3 小鼠结肠组织病理切片及免疫荧光分析  53-55
  4.4 讨论  55-56
结论  56-57
论文创新点  57
发表论文及参加会议情况  57-58
参考文献  58-69
致谢  69

相似论文

  1. 基于电穿孔技术的活细胞表面增强拉曼光谱研究,R318.51
  2. 聚乙烯亚胺修饰糖脂共聚物介导基因治疗研究,R450
  3. 新型非病毒基因转染体系的构建及其在骨髓间充质干细胞基因重组中的应用,R346
  4. 选择复制性腺病毒M4对卵巢癌细胞系体外治疗作用及机制的初步探讨,R737.31
  5. 脉冲电场介导AT2R基因在血管局部表达及其对血管新生内膜影响,R541.4
  6. 胰高血糖素样肽-1及其类似物基因治疗糖尿病的研究,R587.1
  7. Shh基因转染骨髓间充质干细胞治疗慢性缺血性心脏病的实验研究,R541.4
  8. 胞嘧啶脱氨酶基因突变体D314A对人结肠癌细胞的抑制作用,R735.35
  9. 重组腺病毒Adv-AFPsiRNA的构建及其对卵巢癌生长抑制的实验研究,R737.31
  10. 缺氧诱导因子-1α的siRNA抑制肝癌细胞生长的实验研究,R735.7
  11. 非参数限定支持域图像盲复原算法的研究,TP391.41
  12. 盲复原算法在自适应光电图像处理中的应用研究,TP391.41
  13. MACC1基因在肺癌组织及肺癌细胞系中的表达研究,R734.2
  14. 用于诱导多潜能性干细胞的人羊水细胞培养及逆转录病毒包装平台的建立,R450
  15. 腺病毒介导的共表达NK4基因和B7-1基因治疗胰腺癌的体外研究,R735.9
  16. 腺病毒介导胰岛素样生长因子-1基因在Wistar大鼠体内表达时间的研究,R587.1
  17. 大鼠脑缺血再灌注损伤后HIF-1α对胶质亚型细胞修复重塑的调控机制,R743
  18. VEGF及其RNAi对B系淋巴瘤细胞影响的实验研究,R733.1
  19. pIRES2-EGFP-hIL-12-HSP70真核表达载体的构建及对7402肝癌细胞生长的影响,R346
  20. 重组hAFP和hTERT双启动子介导miRNA26a特异表达的肝癌基因治疗实验研究,R735.7

中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学(兽医学) > 各种家畜、家禽、野生动物的疾 > 野生动物疾病 > 实验用动物
© 2012 www.xueweilunwen.com