学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

黄颡鱼DMRT1基因克隆、表达及与生长性状相关性研究

作　者: 李林
导　师: 邹桂伟
学　校: 华中农业大学
专　业: 水产养殖
关键词: 黄颡鱼 DMRT1 基因克隆基因表达生长性状相关性分析
分类号: S917.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 72次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

DMRT基因家族是目前已知控制生物发育的基因家族之一,其编码产物均含有一个具有DNA结合能力的高度保守基序,即DM(果蝇的double-sex基因和线虫的mab-3基因共有的DNA盒基序)结构域,能以锌指结构与特定的DNA序列相结合,调节目的基因转录,从而调控下游基因表达,在性别决定与分化过程中具有重要作用。DMRT1 (double-sex and mab3-relatated transcription factorl)是DMRT基因家族的典型代表,广泛参与脊椎与无脊椎动物的性别发育过程,被认为是继SRY与Sox9之后发现的与性别决定相关的又一重要基因。为了阐明DMRT1在黄颡鱼性别决定及分化过程中的作用,给黄颡鱼的单性育种、雌雄生长差异研究以及鱼类的性别决定与性别分化机制研究提供理论基础,本文利用RACE-SMART及RT-PCR技术从黄颡鱼精巢中分离了DMRT1全长cDNA序列(GenBank Accession No. HM245921),对其在胚胎发育阶段、胚后发育阶段、性腺发育阶段和成体阶段的mRNA表达水平及DMRT1多态性与主要生长性状的相关性进行了研究,主要结论如下：1.黄颡鱼DMRT1基因cDNA全长分离及同源性分析黄颡鱼DMRT1 cDNA全长1381bp,其中5’端非翻译区30 bp,3’端非翻译区454 bp[不包括poly (A)],开放阅读框885bp,编码294个氨基酸。黄颡鱼DMRT1序列与其它物种DMRT1进行同源性比较,结果显示,黄颡鱼DMRT1与鲶形目鱼类胡子鲶、尖齿胡鲶及大口鲶DMRT1氨基酸序列的相似性分别为85%、82%和85%,而保守区DM-domian的相似性高达97.2%-100%,与其它鱼类奥利亚罗非鱼、尼罗罗非鱼、青鳝、斑马鱼及虹鳟的同源性分别为60%、60%、53%、64%和60%；与小鼠及人的同源性较低,分别为43%和45%。2.黄颡鱼DMRT1基因mRNA表达水平分析采用RT-PCR和Real-time RT-PCR技术对DMRT1在黄颡鱼不同发育阶段及雌雄成体不同组织的表达进行了分析。结果表明,在胚胎发育阶段,整个发育过程都有表达,原肠前期(早期、中期)表达水平显著高于其余各期；在胚后发育阶段,前期1-35天表达水平相对较高,31天其表达量达到最高峰,后期36-51天维持在一个相对较低的水平；性腺发育阶段,雄性精巢发育各期均有表达,Ⅳ期表达量最高,而卵巢发育各期均无表达；雌雄成体阶段,仅在雄性精巢组织特异性表达。3.黄颡鱼DMRT1基因多态性与生长性状的相关性分析利用PCR-SSCP方法对黄颡鱼DMRT1与其主要生长性状的关联性进行了分析,结果显示,在其外显子区域SS1位点检测出一个G→A突变位点,导致其编码的氨基酸由甘氨酸(G)突变成了丝氨酸(S)。该位点由一对等位基因(A和B)控制,表现出3种基因型(AA、BB及AB),不同基因型在群体中与主要生长性状的差异分析表明,雌性群体中,除头长、尾柄长及尾柄高外,AA基因型在全长、体长、体高、体厚及体重上均高于BB与AB基因型个体；雄性群体中,在全长、体高、头长及体重性状上,AA基因型同样均高于BB与AB基因型个体,但两个分析群体均没有达到显著水平(P>0.05)；整个群体中,AA基因型个体在全长、体长、尾柄高及体重性状上,显著高于BB基因型(P<0.05),极显著高于AB基因型(P<0.01)；体厚与尾柄长上,AA基因型显著高于BB与AB基因型(P<0.05)；体高与头长上,AA型极显著高于BB与AB基因型(P<0.01),BB与AB基因型之间差异均不显著(P>0.05),该位点可以考虑作为今后黄颡鱼分子标记辅助育种的候选标记,在选育群体中应尽可能地增加AA基因型个体。

全文目录

摘要  6-8
Abstract  8-10
第一章前言  10-23
  1 我国黄颡鱼的养殖现状  10-11
    1.1 黄颡鱼的分类与分布  10
    1.2 黄颡鱼的养殖现状  10
    1.3 黄颡鱼养殖中存在的问题及解决办法  10-11
      1.3.1 个体性成熟早  10
      1.3.2 雌雄生长差异显著  10-11
      1.3.3 雄性率不能达到100%  11
  2 鱼类的性别决定与人工控制  11-18
    2.1 影响性别决定的环境因素  11-13
      2.1.1 温度对性别决定的影响  11-12
      2.1.2 外源激素对性别决定的影响  12-13
      2.1.3 其它因素的影响  13
    2.2 影响性别决定的遗传因素  13-14
    2.3 鱼类性别的人工控制  14-18
      2.3.1 鱼类性别人工控制的意义  14-15
      2.3.2 鱼类性别人工控制的方法及途径  15-18
  3 选题背景  18-23
    3.1 性别相关基因概述  18-22
    3.2 鱼类DMRT1基因的研究进展  22-23
    3.3 本研究的目的和意义  23
第二章黄颡鱼DMRT1基因全长克隆  23-35
  1 材料与方法  23-28
    1.1 实验材料  23-24
      1.1.1 实验样本  23
      1.1.2 主要仪器设备  23-24
      1.1.3 主要试剂  24
      1.1.4 引物设计  24
    1.2 实验方法  24-28
      1.2.1 精巢总RNA抽提  24-25
      1.2.2 DM-domain区扩增  25-26
      1.2.3 5’端及3’端RACE SMART快速扩增  26-27
      1.2.4 基因组内含子扩增  27
      1.2.5 PCR产物分离与纯化  27
      1.2.6 感受态细胞制备  27
      1.2.7 纯化产物克隆转化与测序  27-28
      1.2.8 测序结果分析  28
  2 结果与分析  28-33
    2.1 黄颡鱼DMRT1基因全长分离  28-30
    2.2 黄颡鱼DMRT1基因序列分析  30-33
  3 讨论  33-35
    3.1 黄颡鱼DMRT1 cDNA结构特征  33
    3.2 黄颡鱼DMRT1基因保守性  33-35
第三章黄颡鱼DMRT1基因的表达研究  35-45
  1 材料与方法  35-37
    1.1 实验材料  35-36
      1.1.1 实验样本  35
      1.1.2 主要仪器设备  35
      1.1.3 主要试剂  35
      1.1.4 引物设计  35-36
    1.2 实验方法  36-37
      1.2.1 黄颡鱼DMRT1半定量RT-PCR  36
      1.2.2 黄颡鱼DMRT1 Real-time RT-PCR  36-37
  2 结果与分析  37-43
    2.1 黄颡鱼DMRT1半定量RT-PCR结果  37-39
    2.2 黄颡鱼DMRT1 Real-time RT-PCR结果  39-43
  3 讨论  43-45
第四章黄颡鱼DMRT1基因与生长性状的相关性研究  45-54
  1 材料与方法  45-48
    1.1 实验材料  45
      1.1.1 实验样本  45
      1.1.2 主要仪器设备  45
      1.1.3 主要试剂  45
      1.1.4 引物设计  45
    1.2 实验方法  45-48
      1.2.1 基因组DNA抽提  45-46
      1.2.2 DNA纯度检测  46
      1.2.3 PCR扩增及SSCP基因分型  46-47
      1.2.4 DNA序列测定  47
      1.2.5 数据统计分析  47-48
  2 结果与分析  48-52
    2.1 PCR扩增及多态性检测  48-50
    2.2 群体遗传多样性分析  50-51
    2.3 DMRT1多态性与生长性状相关性分析  51-52
  3 讨论  52-54
    3.1 DMRT1-SS1引物作为黄颡鱼生长性状分子标记的可能性  52
    3.2 DMRT1基因对黄颡鱼生长性状的影响分析  52-54
全文结论  54-55
参考文献  55-63
致谢  63-64
附录  64-65
硕士期间发表的主要论文  65

黄颡鱼DMRT1基因克隆、表达及与生长性状相关性研究

内容摘要

全文目录

相似论文