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通补消积饮对人肺腺癌A549细胞增殖与凋亡影响的研究

作　者: 李义君
导　师: 刘建秋
学　校: 黑龙江中医药大学
专　业: 中西医结合临床
关键词: 通补消积饮 A549 肺癌 细胞增殖 细胞凋亡
分类号: R734.2
类　型: 博士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


目的：研究通补消积饮含药血清对人肺腺癌A549细胞增殖与凋亡及其相关基因PCNA、Survivin表达的影响,探讨通补消积饮治疗肺癌的作用机制。方法：(1)应用倒置显微镜观察不同含药血清作用于A549细胞后对其形态学的影响。(2)采用MTT法观察各组含药血清对A549细胞增殖的影响。(3)分别采用RT-PCR法检测A549细胞PCNA mRNA、Survivin mRNA的表达和Western-blot法检测A549细胞PCNA蛋白、Survivin蛋白的表达。(4)应用Annexin V/PI双染色流式法检测各组对A549细胞凋亡的影响。结果：(1)通补消积饮含药血清作用于A549细胞24h和48h时,有些细胞体积变小,形体固缩,细胞变成不规则状,细胞膜完整,少许细胞脱落。也有少数细胞体积增大,细胞肿胀、细胞膜破裂,呈坏死状。72h时很多细胞形体固缩,体积变小,细胞变成不规则状。细胞肿胀、破裂坏死的细胞也有所增加。(2)分别观察通补消积饮低、中、高剂量含药血清作用于A549细胞24h、48h、72h抑制率,实验结果显示：与同时间点空白血清组比较,差异有显著的统计学意义(P＜0.01),说明通补消积饮对A549细胞具有明显的增殖抑制作用。其增殖抑制作用在一定时间内与剂量一时间呈正相关关系,即随着作用时间的延长和血清药物剂量的增加,其增殖抑制作用明显增强。通补消积饮高剂量组作用72h,达到其最大抑制率,为38.63%。(3)分别观察通补消积饮低、中、高剂量含药血清作用于A549细胞24h、48h、72h凋亡率,实验结果显示：通补消积饮低、中、高剂量含药血清组与同时间点空白血清组比较,差异有显著的统计学意义(P＜0.01),说明通补消积饮对A549细胞具有明显的诱导凋亡作用。其诱导凋亡作用在一定时间内与剂量一时间呈正相关关系,即随着作用时间的延长和血清药物剂量的增加,其诱导凋亡作用明显增强。通补消积饮高剂量组作用72h,达到其最大诱导凋亡率,为36.92%左右。(4)应用RT-PCR法检测结果表明,通补消积饮含药血清作用于A549细胞48h后,PCNA mRNA及Survivin mRNA表达显著下降,且随着通补消积饮剂量的增加,PCNA mRNA及Survivin mRNA表达逐渐下调,并表现出明显剂量依赖性,与空白血清组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。经过通补消积饮含药血清作用于A549细胞48h后,Western-blot方法检测结果显示,随着通补消积饮剂量的增加,PCNA蛋白及Survivin蛋白表达逐渐下调。在蛋白水平上用Western-blot方法检测的结果与RT-PCR方法检测的结果是一致的。结论：(1)通补消积饮对A549细胞有明显的增殖抑制作用,在一定的时间内表现出明显的量-效关系。(2)通补消积饮能有效下调PCNA基因在A549细胞中的表达,这可能是其抑制增殖作用的机制之一。(3)通补消积饮对A549细胞有明显的诱导凋亡作用,在一定的时间内表现出明显的量-效关系。(4)通补消积饮能有效下调Survivin基因在A549细胞中的表达,这可能是其诱导凋亡作用的机制之一。

全文目录


缩略语表  3-4
中文摘要  4-6
ABSTRACT  6-8
前言  8-10
文献综述  10-19
  1. 肺癌的发病机制和治疗现状  10-12
  2. 中医学对肺癌的认识及研究现状  12-15
  3. 肺癌与细胞增殖、凋亡及其相关基因的关系  15-19
实验研究  19-44
  1. 实验材料  19-23
  2. 实验方法与结果  23-25
  实验一. 通补消积饮含药血清对人肺腺癌A549细胞形态的观察  25-26
  实验二. 通补消积饮含药血清对人肺腺癌A549细胞增殖影响的研究  26-28
  实验三. 通补消积饮含药血清对人肺腺癌A549细胞增殖相关基因PCNA表达影响的研究  28-35
  实验四. 通补消积饮含药血清对人肺腺癌A549细胞凋亡影响的研究  35-38
  实验五. 通补消积饮含药血清对人肺腺癌A549细胞凋亡相关基因Survivin表达影响的研究  38-44
讨论  44-52
结论  52-53
致谢  53-54
参考文献  54-60
附录  60-67
攻读博士学位期间发表的论文  67-69
个人简历  69-70
附件  70-79

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 呼吸系肿瘤 > 肺肿瘤
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