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Ax1在伊马替尼治疗慢性粒细胞白血病中的表达及意义

作　者: 乔明吟
导　师: 姜中兴
学　校: 郑州大学
专　业: 血液内科
关键词: 伊马替尼耐药 CML Axl
分类号: R733.72
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

背景与目的慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia, CML),是一种造血干细胞克隆增生性疾病,90%以上的患者骨髓细胞中存在Ph染色体和BCR/ABL融合基因,全球年发病率约为1／10万人口,约占成人白血病的15%-20%,发病高峰介于50-60岁,中位生存期3-4年。它的发生主要是由于t(9；22)(q34；q11)基因移位造成的。Ph染色体编码合成融合基因BCR-ABL。在CML中,p210BCR-ABL可以激活几个酪氨酸激酶家族受体的信号通路,这些可以起一系列的连锁反应从而使CML细胞获得了增殖优势和抗凋亡的能力。在CML的不同疾病阶段,它的临床表现以及它的肿瘤细胞的生物学行为、治疗方法和预后都大不相同。在靶向治疗药物应用于临床之前,大多数CML患者的慢性期一般可持续约3-5年,许多患者在进入加速期4-6个月后即进入疾病的终末期急变期。在CML患者的最初治疗阶段,我们多采用以羟基脲、α-干扰素及化疗、脾脏放疗为主的传统治疗方案。然而这些所谓的传统治疗方案的疗效差,副作用大,使得CML在临床上的遗传学或分子生物学缓解较低。在酪氨酸激酶抑制剂(TKI)发现及应用之前,我们把异基因的造血干细胞移植作为有望治愈CML的唯一方法。但是由于异基因的造血干细胞移植死亡风险大,它无法从根本上提高CML的治疗效果和长期的生存状况。针对P210蛋白的靶向药物TKI一经发现变使CML的治疗获得重大的突破。其具有特异性针对其致病机制和更低毒副作用的优点,更令人欣喜的是TKI对正常的细胞不具任何的杀伤作用。在目前的临床治疗工作中,伊马替尼(IM)是一种酪氨酸激酶抑制剂(TKIs),被作为治疗慢性粒细胞白血病的特效药而广泛的在临床中应用。然而,各个阶段的CML患者经常发生耐药情况。伊马替尼的耐药却困扰着广大临床医师及患者,现阶段的耐药机制仍不明确。Axl是编码受体酪氨酸激酶基因之一。在1991年由O’bryan等[1]在人类慢性髓细胞白血病DNA中发现酪氨酸激酶,Tyro3(又名Rse, Sky, Brt, Dtk, Etk2或Tif)与AXL(又名Ufo, Ark或Tyro7)及Mer(又名Nyk, Eyk或Tyro12)共同组成受体酪氨酸激酶亚家族(TAM family),其核苷酸序列有较高的同源性(28%-36%),具有相似的分子结构,均由胞外区、胞内区和跨膜区3部分组成。Axl是大小约140kD(1D=1u)的跨膜分子,定位于19q13.1,全长42185kb,由698个腺嘌呤、972个胞嘧啶、931个鸟嘌呤和626个胸腺嘧啶构成,有20个外显子。近年来,原癌基因Axl成为研究的新热点之一,在乳腺癌、前列腺癌、肝癌、食管癌、甲状腺癌、胰腺癌、恶性黑色素瘤在内的多种肿瘤均有发现,Axl的表达对这些肿瘤的诊断、预后及治疗的靶向分子应用于临床工作中密切相关,在近期的研究热点中探索其是否可作为新的靶向分子药物的有效性诊断指标。Axl的过度表达是许多癌症细胞的共同特点。在一些研究中发现持续高水平的Axl与胃肠道间质瘤患者使用甲磺酸伊马替尼的耐药相关。在急性白血病的化疗原发耐药同样存在着Ax1的过度表达,而且在一些实体肿瘤耐药病例中,我们也发现了Axl的增高。因此,本研究对59例慢性粒细胞性白血病患者骨髓单个核细胞中的Axl表达水平进行监测,分析其与临床特征、临床疗效的关系,进而来探讨AXL在伊马替尼耐药的CML中的作用,期望对伊马替尼耐药的CML的治疗提供一些方向,从而这些基因的表达可用于指导TKI在临床中的应用,并且成为评价预后的指标。材料与方法1研究对象59例成人CML初治患者来自我科2011年3月——2012年5月住院患者,年龄17—65岁全部病例诊断符合《血液病诊断及疗效标准》[3]的诊断标准。其中20例为初治患者确诊为慢性粒细胞白血病。39例病人均使用伊马替尼治疗大于3月,根据其治疗效果,分别纳入治疗有效组和治疗失败组。治疗有效组32例,治疗失败组7例。12例对照组选自非恶性血液病患者的骨髓。分别监测其骨髓单个细胞的AxlmRNA的表达水平。2实验方法实时RT-PCR法检测AxlmRNA的表达水平：抽取住院病人的骨髓标本,经过分离单个核细胞后,用Trizol法提取细胞总RNA,并检测其质量及浓度,进行逆转录成cDNA, PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳后,将琼脂糖凝胶放入凝胶成像扫描仪中紫外线下成像,用凝胶图像分析系统观察、分析实验结果并拍照。3统计分析采用统计学软件SPSS17.0,实时定量资料属于非正态性计量资料,数据用中位数和四分位数表示,CML患者应用IM治疗失败组、治疗有效组及对照组的AxlmRNA的表达水平相比较,多组间的采用Kruskal-wallis检验,差异有统计学意义的再进行两组间比较,两组间比较采用Mann-Whitney U检验。P＜0.05为具有统计学意义。结果1.CML初治患者Axl mRNA的表达水平为0.7269(0.3562-25.4722),对照组AxlmRNA的表达水平为0.2821(0.1901-0.5926)。2.伊马替尼治疗有效组AxlmRNA表达水平为0.6756(0.3441-21.6161),伊马替尼治疗失败组Axl mRNA表达水平为25.4722(0.4541-33.1631)。其中伊马替尼治疗失败组明显高于对照组,P=0.0001差异有统计学意义。伊马替尼治疗失败组明显高于CML初治组,P=0.0014差异有统计学意义。伊马替尼治疗失败组明显高于伊马替尼治疗有效组,P=0.0025差异有统计学意义。3.CML初治组与对照组比较,P=0.310差异无统计学意义。伊马替尼治疗有效组与对照组比较,P=0.2355差异无统计学意义。4.59例慢性粒细胞性白血病患者均表达Axl,Axl的表达与患者年龄(P=0.069)、性别(P=0.070)、平均血红蛋白水平(P=0.868)、平均血小板计数(P=0.964)、外周血幼稚细胞比例(P=0.911)、脾脏大小(P=0.710)无明显相关。白细胞计数是CML的特征,将CML患者按最初诊断时白细胞计数＞100×109/L为界分为2组,结果发现CML初诊时白细胞计数>100×109/L组Axl表达明显增高(P=0.0395),差异有统计学意义。结论1.CML患者和骨髓象正常的非恶性血液性疾病的人均表达Axl mRNA。2.治疗失败组的Axl mRNA表达水平高于治疗有效组,提示Axl可能与CML患者应用IM治疗耐药发生有关。3.AXL表达与患者性别、年龄、平均血红蛋白水平、平均血小板计数、外周血幼稚细胞比例、脾脏大小无明显相关。AXL表达与CML患者初诊时白细胞计数明显增高有关。

全文目录

摘要  4-8
Abstract  8-12
目录  12-14
前言  14-18
材料与方法  18-26
结果  26-27
讨论  27-30
结论  30-31
附图  31-32
参考文献  32-36
综述  36-49
  参考文献  46-49
个人简历  49-50
致谢  50

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