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牛蒡子苷与苷元对3T3-L1前脂肪细胞分化及糖脂代谢的影响及机制研究

作　者: 刘云云
导　师: 杨瑞仪
学　校: 广州中医药大学
专　业: 中医临床基础
关键词: 牛蒡子苷牛蒡子苷元 3T3-L1前脂肪细胞细胞分化糖脂代谢
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

目的：研究牛蒡子苷(Arctiin)及牛蒡子苷元(Arctigenin)对3T3-L1小鼠前脂肪细胞增殖分化及糖脂代谢的影响,并初步探讨其作用机制。方法：采用不同剂量Arctiin和Arctigenin作用于3T3-L1前脂肪细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测其对细胞增殖的影响；油红0染色法及分光光度法分析脂肪细胞的分化程度及脂肪含量；通过甘油磷酸氧化酶法和比色法分别检测细胞培养液中甘油和游离脂肪酸含量反映脂肪分解状况；通过葡萄糖氧化酶法检测细胞培养液中葡萄糖含量反映细胞对葡萄糖的消耗量；实时荧光定量PCR和Western-blot法在mRNA和蛋白质水平检测细胞过氧化物增殖物激活受体Y (peroxisome proliferators activated receptor γ, PPAR γ)和CCAAT/增强子结合蛋白a (CCAAT enhancer binding protein a, C/EBP α)的表达情况；紫外分光光度法检测脂肪酸合酶(fatty acid synthase, FAS)的活性。结果：Arctiin和Arctigenin在12.5-100μmol/L浓度范围内对3T3-L1前脂肪细胞增殖无显著影响(P>0.05),但显著抑制其向脂肪细胞的分化以及脂肪的合成(P<0.01),且随剂量增加而增强。相同浓度下,Arctigenin抑制细胞分化和成脂的能力优于Arctiin(P<0.01或P<0.05)。Arctigenin在25-100μ mol/L浓度范围内能显著抑制成熟脂肪细胞甘油三酯分解产生甘油和游离脂肪酸(P<0.01或P>0.05),且随剂量增加而抑制作用增强,最高剂量(100μ mol/L)组细胞培养液中甘油含量仅为对照组的28.7%,游离脂肪酸含量为对照组的40.6%。而Arctiin则对脂肪细胞分解无显著影响(P>0.05)。Arctigenin和Arctiin在12.5-100μ mol/L浓度范围内能显著增加成熟脂肪细胞对葡萄糖的消耗(P<0.01)。实时荧光定量PCR结果显示Arctigenin和Arctiin均能降低3T3-L1前脂肪细胞分化过程中的PPARγ和C/EBP a mRNA表达水平(P<0.01或P<0.05),且高浓度抑制作用优于低浓度。Arctigenin最高剂量(100μmol/L)组PPARγ和C/EBPα mRNA水平仅为对照组的13.5%和6.3%；Arctiin最高剂量(100μmol/L)组PPARγ和C/EBP α mRNA水平仅为对照组的33.9%和8.4%。Western-blot结果同样显示,与对照相比,Arctigenin和Arctiin可降低PPARγ和C/EBP α蛋白表达水平且呈剂量依赖关系。表明Arctigenin和Arctiin均能在转录和翻译水平上抑制PPARγ和C/EBP α表达。Arctigenin和Arctiin在12.5-100μ mol/L浓度范围内能有效降低脂肪细胞FAS的活性(P<0.01或P<O.05)。相同浓度下,Arctigenin抑制FAS活性的作用强于Arctiin(P<0.01或P<0.05)。结论：Arctiin与Arctigenin对3T3-L1前脂肪细胞无明显毒性,可抑制脂肪细胞分化,促进脂肪细胞对葡萄糖的消耗；Arctigenin可抑制脂肪细胞的脂肪分解。其作用机制可能与下调PPARγ和C/EBP a基因表达、抑制FAS活性有关。

全文目录

摘要  3-5
Abstract  5-7
目录  7-9
引言  9-11
第一章文献综述  11-24
  第一节肥胖概述  11
  第二节脂肪组织  11-20
    一、脂肪组织的分类  11-12
    二、脂肪组织的功能  12
    三、脂肪细胞的增殖分化  12-16
    四、脂肪细胞的分解  16-17
    五、脂肪代谢与糖代谢  17
    六、糖脂代谢紊乱与IR  17-20
  第三节牛蒡子苷与苷元及其药理活性  20-24
    一、牛蒡子及其化学成分  20-21
    二、Arcti in及Arctigenin降糖降脂的药理作用  21-24
第二章研究报告  24-53
  第一节牛蒡子苷与苷元对3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响  24-27
    一、实验材料  24-25
    二、实验方法  25
    三、实验结果  25-26
    四、讨论  26-27
  第二节牛蒡子苷与苷元对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响  27-32
    一、实验材料  27-28
    二、实验方法  28
    三、实验结果  28-30
    四、讨论  30-32
  第三节牛蒡子苷与苷元对脂肪细胞脂肪分解的作用  32-37
    一、实验材料  32-33
    二、实验方法  33-34
    三、实验结果  34-36
    四、讨论  36-37
  第四节牛蒡子苷与苷元对脂肪细胞糖代谢的影响  37-41
    一、实验材料  37
    二、实验方法  37-38
    三、实验结果  38-39
    四、讨论  39-41
  第五节牛蒡子苷与苷元对PPAR γ和C/EBP α基因表达的影响  41-49
    一、实验材料  41-43
    二、实验方法  43-46
    三、实验结果  46-47
    四、讨论  47-49
  第六节牛蒡子苷与苷元对FAS活性的影响  49-53
    一、实验材料  49-50
    二、实验方法  50
    三、实验结果  50-51
    四、讨论  51-53
结语  53-54
参考文献  54-61
附录  61-64
在校期间发表论文情况  64-65
致谢  65

牛蒡子苷与苷元对3T3-L1前脂肪细胞分化及糖脂代谢的影响及机制研究

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