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槟榔的促胃动力作用及其有效组分的探索

作　者: 王平
导　师: 魏睦新
学　校: 南京医科大学
专　业: 内科学
关键词: 甘草胃动力低下槟榔 Cajal 间质细胞 c-kit
分类号: R285.5
类　型: 博士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

目的：1.利用甘草制作胃动力低下大鼠模型，观察其胃残留率及小肠推进率的影响；2.观察槟榔对胃动力低下大鼠胃残留率、小肠推进率的影响，并利用SPECT测定胃半排空时间，观察槟榔对胃动力作用的影响；3.透射电镜观察槟榔对Cajal 间质细胞超微结构的改变及其与周围肠神经系统的关系，免疫组化方法探索槟榔对c-kit在模型大鼠胃组织中表达的影响。4.采用HPLC对槟榔成分进行分析，观察其对离体胃平滑肌细胞收缩效应的影响，并使用LC-MS分析有效组分。方法：1.胃动力低下大鼠模型的建立制备生甘草溶液，分为2.5、5、7.5、10、15g/kg5个剂量组，予大鼠每日灌胃，持续5d。以苯酚红测定法，紫外分光光度计测胃残留率，并测量计算小肠推进率。使用SPECT检测99mTc-MIBI溶液在各组大鼠胃内的半排空时间。2.槟榔对胃动力的影响采用方法1建立胃动力低下大鼠模型，以莫沙必利作为对照药物，分为模型组（10g/kg甘草）、正常对照组（0.9％NaCl）、西药组（0.4mg/kg莫沙必利）以及中药槟榔组（10g/kg槟榔），灌胃7d后，测量各组大鼠的胃残留率、小肠推进率、胃半排空时间。3.槟榔对胃内ICC超微结构及c-kit表达的影响造模方法同1，分组方案同2，摘取全胃，并取胃底、胃体、胃窦组织各两块。其中一块制作超薄切片，透射电子显微镜观察记录；另一块制作免疫组化标本，观察c-kit抗体表达，计算阳性细胞面积。4.槟榔有效组分的分析提取及其对离体平滑肌的作用制备槟榔冻干粉，制作豚鼠平滑肌肌条，观察不同批次提取物对肌条的效应，选取有效批次槟榔提取物，HPLC记录其紫外吸收图谱并提取有效成分，观察其对豚鼠离体平滑肌的收缩效应，LC-MS测定其分子量。结果：1.不同剂量（2.5、5、7.5、10、15g/kg）甘草溶液灌胃后发现，10g/kg剂量组的胃残留率比其它组别要高，明显高于正常对照组（P＜0.01），且胃半排空时间延长（P＜0.05）。而5g/kg剂量组的小肠推进率与正常对照组相比，具有统计学意义（P＜0.05）。2.与正常对照组相比，中药槟榔组及莫沙必利组的胃残留率降低（P＜0.05），胃半排空时间缩短，而小肠推进率增大；同时，模型组胃残留率高于其他三组（P＜0.05），胃半排空时间延长。槟榔组与莫沙必利组无统计学差异。3.电镜观察发现模型组大鼠胃内ICC形状较扁，甚至不规则，向外伸展的突起变短小；其余三组大鼠ICC呈纺锤形,有巨大的卵圆形核及向外伸展的长突起，25000倍放大观察发现，胞质内有丰富的线粒体，大量滑面内质网和粗面内质网。槟榔组ICC与周围的肠神经元轴突间突触样连接增多。四组中，胃内C-kit阳性表达最高部位均为胃窦部，高于胃体部、胃底部。槟榔组的c-kit阳性表达面积最高，尤其在胃窦部（7.97±0.39万μm2）。4.分取槟榔不同组分进行豚鼠离体平滑肌实验，选取有效组分进行HPLC成分分析，紫外吸收光谱显示69个峰值，其中34、42最高，提取该组分，发现10μmol/L剂量BL42对平滑肌胃环形肌和胃纵行肌的收缩效应最强，其曲线下面积分别为5.96±0.58,5.64±0.52g/s，接近于Ach效应。LC-MS检测发现，该有效成分分子量不同于槟榔碱。结论：1.在剂量为10g/kg时，中药甘草可以增加大鼠的胃残留率，延长胃半排空时间，因此可以用来建立胃动力低下大鼠模型。2.槟榔能够降低胃动力低下模型大鼠的胃残留率，缩短胃半排空时间，并增高小肠推进率，推测槟榔具有促进胃动力作用。3.槟榔能够增加胃动力低下大鼠胃内ICC与周围肠神经系统的联系，并使c-kit在胃窦、胃体、胃底的阳性表达面积加大，提示槟榔的促胃动力作用与ICC具有一定联系。4.HPLC制备的槟榔内组分BL34、BL42对豚鼠离体平滑肌具有较强收缩效应，且该作用类似于Ach，该物质成分的具体分子结构尚需进一步实验研究。

全文目录

中文摘要  4-7
Abstract  7-12
前言  12-15
第一部分甘草建立胃动力低下大鼠模型的研究  15-31
  一、实验材料  15-16
  二、实验方法  16-18
  三、实验结果  18-23
  四、讨论  23-29
  参考文献  29-31
第二部分槟榔促进胃动力低下大鼠胃肠动力的研究  31-47
  一、实验材料  31-32
  二、实验方法  32-34
  三、实验结果  34-38
  四、讨论  38-44
  参考文献  44-47
第三部分槟榔对胃动力低下大鼠胃组织 Cajal 间质细胞形态学的改变及对 c-kit表达的影响  47-71
  一、实验材料  47-50
  二、实验方法  50-53
  三、实验结果  53-58
  四、讨论  58-67
  参考文献  67-71
第四部分槟榔促胃平滑肌动力有效组分的研究  71-92
  一、实验材料  71-73
  二、实验方法  73-75
  三、实验结果  75-83
  四、讨论  83-89
  参考文献  89-92
综述：消化道 Cajal 间质细胞研究进展  92-104
  参考文献  100-104
中英文缩略语对照表  104-105
攻读期间发表论著  105-107
致谢  107

槟榔的促胃动力作用及其有效组分的探索

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