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藏药旺拉提取物CE对Aβ_(25-35)介导的大鼠神经元毒性损伤作用的研究

作　者: 周雅楠
导　师: 覃筱燕
学　校: 中央民族大学
专　业: 植物学
关键词: 藏药旺拉提取物 前额叶神经元 Aβ25-35 β-tubulinⅢ
分类号: R29
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
下　载: 19次
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内容摘要


藏药旺拉是一种传统藏药,为兰科植物凹舌兰(Coeotgolssum viride (L.) Hartm. var. barctaetum (Wild.) Rihcter)的干燥块茎,具有补气益血、生津止渴、安神增智等功效,药理研究显示旺拉提取物CE可以有效改善痴呆小鼠、亚急性衰老小鼠的学习记忆能力。本研究采用大鼠乳鼠前额叶神经元体外培养的方法,观察藏药旺拉提取物CE对Aβ25-35介导的大鼠乳鼠神经元毒性损伤的作用,采用免疫组织化学方法鉴定了培养的大鼠乳鼠前额叶神经细胞纯度；采用MTT方法测定了培养的大鼠乳鼠前额叶神经细胞活性；采用TUNEL法检测了培养的大鼠乳鼠前额叶神经细胞凋亡情况；采用免疫组织化学方法检测了培养的大鼠乳鼠前额叶神经细胞中微管蛋白β-tubulin III蛋白的形态结构及表达。为进一步研究藏药旺拉提取物CE对神经元的保护作用及作用机制提供了新的资料。主要结论归纳如下：1.对培养第5天的大鼠乳鼠前额叶神经元进行p-tubulin III和DAPI免疫组织化学染色,β-tubulinⅢ性染色为绿色细胞突起,能较好地显示细胞的形态,DAPI日性染色细胞核为蓝色,实验结果显示培养出良好的前额叶神经元,且纯度>95%。2.MTT法和TUNEL法检测细胞的凋亡,发现在培养的大鼠乳鼠前额叶神经元中加入20μmol/L的Aβ25-35处理24小时对神经细胞有明显的神经毒性,包括细胞活力的下降、细胞凋亡率的增加。3.MTT法和TUNEL法检测发现,在培养的大鼠乳鼠前额叶神经元中用CE预处理后加入Aβ25-35处理能够抑制Aβ25-35产生的神经毒性,且不同浓度CE(0.1mg/mL、1mg/mL、10mg/mL)对Ap25-35介导的大鼠乳鼠神经元毒性损伤的作用结果表明CE对Aβ25-35介导的大鼠乳鼠神经元损伤细胞活性具有保护作用存在一定的剂量依赖性。4·免疫组织化学的方法检测神经元的特异性标记物β-tubulinⅢ,发现Aβ25-35处理前额叶神经元后,β-tubulin Ⅲ的染色明显减少,CE提取物可部分恢复β-tubulin ⅡI的染色。

全文目录


摘要  2-4
ABSTRACT  4-10
第一章 综述  10-20
  第一节 藏药旺拉的研究与应用现状  10-15
    一、藏药旺拉的化学成分研究进展  10-11
      1. 氨基酸成分  10-11
      2. 其他化学成分  11
    二、藏药旺拉的药理作用研究进展  11-15
      1. 抗氧化活性  12
      2. 抗衰老活性  12-13
      3. 抗痴呆活性  13-14
      4. 调节免疫功能  14
      5. 其他活性  14-15
  第二节 阿尔茨海默病的研究现状及进展  15-19
    一、Aβ在阿尔茨海默病中的作用  15-17
      1. AD中Aβ的组织化学  15-16
      2. Aβ的生成途径  16-17
      3. Aβ的神经毒性  17
      4. Aβ的生理功能  17
    二、阿尔茨海默病发病的其他机制  17-18
    三、阿尔茨海默病的治疗  18-19
  第三节 本研究的意义  19-20
第二章 实验研究  20-33
  第一节 实验材料与方法  20-26
    一、实验材料  20-22
      1. 动物  20
      2. 实验药品配制  20-21
      3. 试剂  21
      4. 仪器  21-22
    二、实验方法  22-26
      1. 大鼠乳鼠前额叶神经细胞原代培养  22-23
      2. 形态学观察  23
      3. 实验分组  23
      4. 大鼠前额叶神经细胞鉴定  23
      5. 免疫组织化学方法观察  23-24
      6. MTT测定神经细胞相对活性  24
      7. TUNEL法测定神经元中凋亡阳性细胞  24-25
      8. 实验结果的统计处理  25-26
  第二节 结果与讨论  26-33
    一、大鼠前额叶神经细胞生长状况  26
    二、形态学观察  26-27
    三、CE对Aβ_(25-35)介导的神经细胞损伤的细胞活性的影响  27-28
    四、CE对Aβ_(25-35)介导的神经细胞损伤的细胞凋亡的影响  28-29
    五、CE对Aβ_(25-35)介导的神经细胞骨架蛋白紊乱的影响  29-31
    六、讨论  31-33
第三章 基本结论  33-34
参考文献  34-42
致谢  42-43
攻读学位期间发表的学术论文目录  43
参与的课题  43-44

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中国少数民族医学
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