学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

沙棘多糖的提取纯化及体内、体外功能研究

作　者: 宋亮
导　师: 王玉珍
学　校: 内蒙古农业大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 沙棘多糖 LPS 肝损伤巨噬细胞细胞因子
分类号: S793.6
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
下　载: 57次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

沙棘多糖是由半乳糖、阿拉伯糖、甘露糖和葡萄糖组成的中性多糖,具有较强的清除氧自由基活性的作用。LPS可刺激可导致宿主细胞因子失控性表达,介导严重感染,肝脏作为机体的主要解毒器官,无疑是清除LPS的最活跃场所,而脂多糖对肝脏损害的主要机制是通过枯否细胞和巨噬细胞使细胞因子的产生过度活化,因此研究沙棘多糖在LPS导致小鼠急性肝损伤和巨噬细胞活化失控中的作用及机制,对未来沙棘多糖药物在肝炎临床上的治疗具有重要意义。1.运用水提、醇沉和凝胶柱层析的方法得到沙棘多糖纯品。2.体内实验,健康昆明白鼠随机分为四组：正常组、模型组、多糖低剂量组、多糖高剂量组,腹腔注射LPS (10mg/kg)构建肝损伤模型。通过病理切片的观察和ALT、AST的检测来说明肝脏组织病理变化,用RT-QPCR检测肝脏细胞因子变化。结果发现多糖组小鼠血清的ALT、AST和NO的水平明显低于模型组,多糖组肝组织TNF-α、IL-1β、IL-6、iNOS的mRNA表达水平也明显著低于模型组,且高剂量组多糖作用效果更为明显。3.体外实验,以RAW264.7细胞为实验材料,研究沙棘多糖对LPS刺激的巨噬细胞的作用。本研究又用PDTC、KT5720、H-7预处理细胞,通过RT-QPCR检测细胞因子mRNA的表达,对多糖作用的信号途径进行研究。结果发现多糖对LPS刺激的巨噬细胞TNF-α、IL-1β、IL-6、iNOS的mRNA表达具有明显的抑制作用,同时发现PDTC、H-7和多糖共同孵育细胞能明显的抑制细胞因子的产生,KT5720的作用弱一些。从以上研究中得出结论：沙棘多糖对LPS造成的损伤具有显著的恢复作用,其作用机制极可能是参与到信号途径中起作用。

全文目录

摘要  3-4
Abstract  4-10
1 引言  10-14
  1.1 多糖的介绍  10
  1.2 植物多糖的研究进展  10-11
    1.2.1 增加巨噬细胞的生物学功能  10
    1.2.2 激活T和B淋巴细胞  10-11
    1.2.3 调节多种炎性因子的分泌  11
    1.2.4 补体的激活作用  11
    1.2.5 抗肿瘤作用  11
    1.2.6 降血糖、降血脂的作用  11
  1.3 沙棘的研究进展  11-13
    1.3.1 沙棘概况  11-12
    1.3.2 沙棘多糖的介绍  12-13
      1.3.2.1 沙棘多糖的提取和纯化  12-13
      1.3.2.2 沙棘多糖的主要生物学功能  13
  1.4 研究的目的及意义  13-14
2 沙棘多糖的提取纯化  14-20
  2.1 材料  14-15
    2.1.1 实验材料及试剂  14
    2.1.2 仪器  14-15
  2.2 实验方法  15-17
    2.2.1 沙棘多糖的提取  15-16
      2.2.1.1 预处理过程  15
      2.2.1.2 回流脱脂  15
      2.2.1.3 超声裂解  15
      2.2.1.4 热水提取  15
      2.2.1.5 浓缩  15
      2.2.1.6 脱蛋白和蛋白质含量的测定  15
      2.2.1.7 醇沉  15-16
      2.2.1.8 抽滤  16
    2.2.2 多糖的纯化  16-17
      2.2.2.1 脱色  16
      2.2.2.2 透析  16
      2.2.2.3 分级沉淀  16
      2.2.2.4 多糖的Sephadex G-150凝胶柱纯化  16-17
      2.2.2.5 SephadexG-100鉴定多糖纯度  17
      2.2.2.6 沙棘多糖的含量测定  17
  2.3 结果与分析  17-19
    2.3.1 沙棘多糖的脱脂结果分析  17
    2.3.2 沙棘多糖的除蛋白结果分析  17-18
    2.3.3 粗多糖的纯化结果  18
    2.3.4 多糖纯度的鉴定  18-19
    2.3.5 标准曲线的绘制及多糖的含量测定  19
      2.3.5.1 标准曲线的绘制  19
      2.3.5.2 HRPⅠa多糖含量的计算  19
  2.4 讨论  19-20
  2.5 结论  20
3 对小鼠急性肝损伤的保护作用研究  20-30
  3.1 实验材料  20
  3.2 实验方法  20-23
    3.2.1 动物模型制作  20
    3.2.2 取材与指标检测  20-23
      3.2.2.1 血清ALT和AST的测定  20-21
      3.2.2.2 血清SOD、GSH-Px、MDA浓度的测定  21
      3.2.2.3 肝脏组织切片的制作  21
      3.2.2.4 NO含量的测定  21
      3.2.2.5 RT-QPCR检测肝组织的TNF-α、IL-1β、IL-6的表达  21-23
        3.2.2.5.1 小鼠肝组织总RNA的提取  21-22
        3.2.2.5.2 cDNA的制备  22-23
        3.2.2.5.3 引物序列和荧光定量的反应条件  23
      3.2.2.6 统计学分析  23
  3.3 结果与分析  23-29
    3.3.1 沙棘多糖对肝损伤小鼠血清ALT和AST水平的影响  23-25
    3.3.2 沙棘多糖对小鼠血清NO含量的影响  25-26
    3.3.3 多糖对肝匀浆上清SOD、GSH-Px活性和MDA含量的影响  26-27
    3.3.4 HE染色观察肝脏组织形态学变化  27-28
    3.3.5 沙棘多糖对肝组织的TNF-α、IL-1β、IL-6、iNOS的表达的影响  28-29
  3.4 讨论  29-30
  3.5 结论  30
4 沙棘多糖对LPS刺激的巨噬细胞的作用及信号途径的探讨  30-38
  4.1 材料  30-31
    4.1.1 实验材料及试剂  30
    4.1.2 仪器  30
    4.1.3 试剂配制  30-31
  4.2 实验方法  31-32
    4.2.1 小鼠巨噬细胞株RAW 264.7的培养  31
    4.2.2 药物处理对LPS刺激的影响  31
      4.2.2.1 细胞生存状态的观察  31
      4.2.2.2 细胞因子表达量的测定  31
    4.2.3 沙棘多糖参与巨噬细胞的信号途径的研究  31-32
      4.2.3.1 沙棘多糖对RAW264.7细胞最佳作用剂量的研究  31
      4.2.3.2 沙棘多糖对RAW264.7细胞最佳作用时间的研究  31-32
      4.2.3.3 多糖诱导产生细胞因子的信号途径的初步研究  32
  4.3 结果与分析  32-36
    4.3.1 不同浓度多糖对LPS刺激的巨噬细胞的生存状态的影响  32
    4.3.2 多糖对LPS刺激的巨噬细胞的细胞NO的产生的影响  32-33
    4.3.3 多糖对LPS刺激的巨噬细胞的炎性因子mRNA表达的影响  33-34
    4.3.4 不同剂量沙棘多糖作用于细胞24h产生的影响  34
    4.3.5 沙棘多糖对细胞作用不同时间产生的影响  34-35
    4.3.6 抑制剂对巨噬细胞NO释放的影响  35
    4.3.7 抑制剂对巨噬细胞的炎性因子mRNA表达的影响  35-36
  4.4 讨论  36-37
  4.5 结论  37-38
5 展望  38-39
致谢  39-40
参考文献  40-43
作者简介  43

沙棘多糖的提取纯化及体内、体外功能研究

内容摘要

全文目录

相似论文