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小鼠睾丸特异性miR-471的表达及功能初步研究

作　者: 侯若愚
导　师: 吴际
学　校: 上海交通大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: microRNAs 精原干细胞精子发生过量表达细胞增殖
分类号: Q75
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 38次
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内容摘要

microRNA (miRNA)是一类长度约22nt的小分子单链RNA,在生物体中广泛存在并在各种生理过程中起重要的调控作用。在不同生物中,通过大规模高通量文库筛选和微阵列研究至今已在不同生物中发现众多miRNA家族成员,但对其功能研究相对有限,尤其是miRNA对雄性生殖细胞发育调控方面报道更少。在本研究中,我们集中对小鼠X染色体连锁的miR-471进行了初步的功能研究。我们发现miR-471在小鼠睾丸中的表达模式随时序变化,即在10天左右达到一个较高水平,在15天前后急剧下降,在成年期维持中等表达水平；我们通过PCR克隆构建了miR-471表达质粒,并利用3T3细胞的瞬时表达证明了这一表达系统的有效性。通过筛选稳定表达细胞株,我们发现miR-471过量表达能够显著促进细胞增殖；利用本实验室已经建立的小鼠精原干细胞(SSC)体外培养体系,我们发现miR-471体外转基因系统也能够促进SSC的体外增殖。上述实验结果提示miR-471可能在小鼠SSC增殖过程中起调控作用,为进一步研究miR-471的功能奠定基础,以及为研究其他小鼠睾丸特异性1miRNA的功能提供重要参考。

全文目录

摘要  5-7
ABSTRACT  7-10
缩写  10-11
第一章研究背景  11-26
  1.1 引言  11
  1.2 miRNA及其生物学功能  11-18
    1.2.1 miRNA的生物合成  11-13
    1.2.2 miRNA的作用机制  13-14
    1.2.3 miRNA的功能  14-17
    1.2.4 miRNA在雄性生殖细胞中的作用  17-18
  1.3 小鼠SSC及精子发生中的调控  18-26
    1.3.1 小鼠精子发生与SSC  18-21
    1.3.2 小鼠SSC小生境及其调控  21-23
    1.3.3 小鼠SSC的分离培养  23-26
第二章实验材料与方法  26-40
  2.1 器材、材料与试剂  26-29
  2.2 小鼠睾丸RNA提取与qPCR检测  29-31
  2.3 miRNA表达载体构建  31-32
  2.4 pcDNA3.1-pri-miR-471在3T3细胞中的表达  32-35
  2.5 稳定表达细胞株的生长曲线与增殖分析  35-36
  2.6 小鼠SSC的原代培养与转染  36-39
  2.7 生物信息学与统计分析  39-40
第三章实验结果  40-54
  3.1 miR-471的生物信息学分析  40-43
  3.2 初生小鼠睾丸中miR-471的表达时序分析  43-45
  3.3 miR-471的克隆与表达载体构建  45-46
  3.4 miR-471在3T3细胞中的过量表达研究  46-51
  3.5 miR-471在体外培养小鼠SSC中的过量表达研究  51-54
第四章讨论  54-57
第五章总结与展望  57-58
参考文献  58-65
附录  65-81
  附录1 mmu-mir-471及同簇miRNA靶基因预测结果  65-79
  附录2 测序图谱  79-81
致谢  81-82
攻读硕士学位期间论文发表情况  82
本研究得到以下基金支持  82

小鼠睾丸特异性miR-471的表达及功能初步研究

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