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可视化环介导等温扩增技术检测EV71、CVA16、HPV6和HPV16

作　者: 罗乐
导　师: 芦春斌
学　校: 暨南大学
专　业: 发育生物学
关键词: 环介导等温扩增技术（LAMP）可视化人肠道病毒71型（HEV71）柯萨奇病毒A组16型（CVA16）人乳头瘤病毒（HPV）
分类号: Q939.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

目的：建立和评价基于现场的快速检测EV71-C4、CVA16、HPV6和HPV16型的可视化LAMP技术。方法：建立可视化RT-LAMP检测EV71-C4和CVA16：分别选择人肠道病毒71型VP1基因(GenBank:GQ279370.1)和柯萨奇病毒A组16型病毒VP1基因(GenBank:GQ279371.1)设计RT-LAMP引物；建立特异性检测EV71和CVA16的RT-LAMP方法，对其进行方法学（包括特异性、灵敏度等）评价，与病毒分离方法的鉴定结果进行比较。建立可视化LAMP检测HPV6和16型：分别选择人乳头瘤病毒6型E6基因(GenBank:HE599243.1)和人乳头瘤病毒16型E7基因(GenBank:FJ610152.1)设计LAMP引物；建立特异性检测HPV6和HPV16的LAMP方法，对其进行方法学（包括特异性、灵敏度等）评价，与潮州凯普HPV分型试剂盒的检测结果进行比较。结果：利用可视化的RT-LAMP检测EV71-C4和CVA16的方法灵敏度分别达到0.33TCID50和1.58TCID50。对不同来源的肠道病毒细胞培养物的验证结果表明未出现交叉反应，特异性较好。通过对47份肠道病毒感染临床标本进行检测，发现结果与病毒分离培养结果一致。利用可视化的LAMP检测HPV6和HPV16的方法灵敏度均为1000拷贝。通过对13份单重感染13种HPV亚型的临床样品进行该方法的特异性分析，结果表明该方法特异性较好。通过对62份宫颈刮片临床标本进行检测，结果与潮州凯普HPV分型检测试剂盒一致。结论：成功建立了可视化RT-LAMP检测EV71-C4、CVA16和可视化LAMP技术检测HPV6、16，有助于提高我国手足口病监测网络实验室的检测能力和提高我国宫颈普查的质量。

全文目录

摘要  3-5
Abstract  5-8
前言  8-10
第一部分 LAMP技术  10-16
  1.1 LAMP技术的发明  10
  1.2 LAMP的引物组成  10
  1.3 LAMP的扩增原理  10-11
  1.4 LAMP的特点  11-12
  1.5 LAMP扩增结果判定  12
  1.6 LAMP在微生物检测上的应用  12-14
  1.7 LAMP技术展望  14-16
第二部分可视化RT-LAMP技术在EV71和CVA16检测中的研究及应用  16-26
  2.1 立题的背景和依据  16-17
  2.2 实验室常用诊断方法  17-18
  2.3 实验部分  18-20
  2.4 实验结果  20-24
  2.5 讨论  24-26
第三部分可视化LAMP在HPV6和16检测中的研究及应用  26-39
  3.1 立题的背景和依据  26
  3.2 HPV分型检测方法  26-28
  3.3 实验部分  28-31
  3.4 实验结果  31-37
  3.5 讨论  37-39
总结  39-40
参考文献  40-46
附录Ⅰ 英文缩略词索引  46-47
附录Ⅱ 本研究中所用试剂配方  47-49
攻读硕士学位期间发表论文及申请专利  49-50
致谢  50

可视化环介导等温扩增技术检测EV71、CVA16、HPV6和HPV16

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