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大鼠脂肪干细胞向神经样细胞分化的研究

作 者: 刘永明
导 师: 胡晓晴; 唐洲平
学 校: 华中科技大学
专 业: 神经病学
关键词: 脂肪干细胞 多向分化 成脂细胞 成骨细胞 细胞球 神经干细胞 神经元 胶质细胞 诱导分化 细胞因子
分类号: R329.2
类 型: 硕士论文
年 份: 2012年
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内容摘要


目的探索并固定大鼠脂肪干细胞获得、增殖和传代的方法和操作流程,并且通过诱导脂肪干细胞分化为成脂细胞成骨细胞而证明脂肪干细胞的多向分化能力。方法取质量约120克的SD大鼠2只,性别不限,分离其腹股沟脂肪组织,将其剪碎并用滤网过滤,然后经一系列操作而将含有脂肪干细胞的培养液平铺于25cm2培养瓶中培养,并进而增殖、传代。之后,通过细胞流式分析检测第三代细胞表型证明其为脂肪干细胞。之后分别更换成脂诱导培养基和成骨细胞培养基,诱导脂肪干细胞定向分化为脂肪细胞和骨细胞。结果成功分离培养出脂肪干细胞,并能进行增殖和传代。利用流式细胞技术检测脂肪干细胞的CD34(+)、CD44(+)、CD45(-)、CD106(+),证明该细胞为脂肪干细胞。而向脂肪和成骨细胞诱导的细胞均发生了明显变化,最后分别通过油红O染色和碱性磷酸酶试剂盒证明脂肪干细胞分化为脂肪细胞和成骨细胞。结论脂肪组织中存在脂肪干细胞,并能够成功的分离、增殖和传代。并且拥有多向分化能力。可以成功的诱导分化为脂肪细胞和成骨细胞。目的:使用神经细胞诱导液将脂肪间充质干细胞定向诱导分化为神经样细胞。方法:首先是将第三代脂肪间充质干细胞在培养瓶中贴壁达到80%以上时消化,然后使其重新贴壁于六孔板中,细胞数量约为105级。然后用添加了bFGF和EGF以及B27的Neurobasal培养基培养六孔板中的细胞。每3天半量添加新的培养液,至5-7天左右就可以看到细胞增殖形成培养液中悬浮的细胞球。取诱导培养第7天的细胞球进行nestin的免疫荧光染色。最后,将培养好的细胞球吹散,离心,并将之培养在仅添加了B27的Neurobasal培养基中诱导分化10天,然后再进行NeuN、GFAP和β-tubulin荧光染色来鉴定分化成的细胞。结果:在使用了含有bFGF和EGF以及B27的Neurobasal培养基诱导了5天时就出现了悬浮的细胞球,并且通过免疫荧光染色证明为nestin阳性,证明其为神经干细胞的细胞球。而在使用了仅添加了B27的Neurobasal培养基中诱导分化10天后,打散的细胞球细胞也分化成了神经细胞,并经过了MAP2ab、NeuN、GFAP和β-tubulin荧光染色鉴定,证明分化成了神经元和星形胶质细胞。结论:经特定的诱导培养液诱导后,脂肪间充质干细胞可以被诱导分化为神经干细胞并且进一步分化为神经元和胶质细胞。

全文目录


缩略词  6-7
前言  7-9
  参考文献  8-9
第一部分 大鼠脂肪干细胞的获取、增殖、传代以及多向分化能力的检测  9-25
  摘要  9-10
  Abstract  10-11
  材料和方法  11-17
  结果  17-18
  讨论  18-19
  参考文献  19-20
  附图  20-25
第二部分 脂肪干细胞定向分化为神经样细胞  25-39
  摘要  25-26
  Abstract  26-27
  材料和方法  27-32
  结果  32-33
  讨论  33-35
  参考文献  35-36
  附图  36-39
综述  39-50
  参考文献  47-50
附录  50-51
致谢  51-52

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 人体形态学 > 人体组织学 > 人体细胞学
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