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基于计算机辅助分子设计的抗CD20单克隆抗体的改造

作　者: 王玉刚
导　师: 沈倍奋
学　校: 中国人民解放军军事医学科学院
专　业: 分子免疫学
关键词: 1-28 CO20 嵌合抗体 scFv-Fc 计算机辅助分子设计
分类号: R392
类　型: 博士论文
年　份: 2005年
下　载: 148次
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内容摘要

鼠源单克隆抗体在临床应用中有以下缺点:诱发人体产生人抗小鼠抗体（human anti-mounse antibody,HAMA）反应,在人体内半寿期短,不能够有效地激活人体的生物效应功能,如补体依赖的细胞毒作用（complement-dependent cytotoxicity,CDC）及抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用（antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC）。通过分子生物学技术对鼠抗体进行人源化改造在一定程度上可以克服这些缺点。本室制备的鼠源抗CD20单克隆抗体（monoclonal antibody,mAb）1-28具有潜在的应用价值。本研究在对mAb 1-28（简称1-28）功能进行验证的基础上,通过计算机辅助分子设计和分子生物学技术对其进行改造,构建了抗CD20嵌合抗体C1-28和新型小分子抗CD20抗体5S（ScFv-Fc）,并对其抗原结合特性及通过CDC杀伤肿瘤细胞的功能进行了初步研究。 1 抗CD20单克隆抗体1-28的免疫学特性及功能分析首先分析了1-28与靶细胞的结合活性。间接免疫荧光的结果显示,1-28可与人B细胞淋巴瘤Daudi细胞和Raji细胞结合,而不与人T细胞系Jurkat细胞结合,表明1-28与靶细胞的结合是特异的。流式细胞术分析结果显示,1-28与Daudi和Raji细胞结合的阳性率达99%以上。相对亲和力（relative binding affinity）测试结果显示,1-28的亲和力为美罗华亲和力的1/12左右。通过ELISA法测定出1-28的亲和常数为K=1.6×10¹⁰ M^-1。竞争实验的结果提示1-28与另外两种抗CD20抗体（美罗华、2H7）识别的是不同的抗原表位。1-28对Raji细胞和Daudi细胞都具有生长抑制效应,但是程度不同。另外,1-28可以诱导Raji细胞和Daudi细胞发生凋亡。1-28还可通过激活补体杀伤靶细胞。以Raji细胞为研究对象时,其半数杀伤浓度为1.26 nmol/L。1-28对非靶细胞Jurkat没有CDC的功能,提示这种杀伤是特异的。

全文目录

英文缩写及中英文对照  4-5
中文摘要  5-8
英文摘要  8-11
前言  11-14
第一部分抗CD20单克隆抗体1-28的功能鉴定  14-29
  1.1 材料与方法  14-17
  1.2 结果  17-25
  1.3 讨论  25-28
  1.4 小结  28-29
第二部分嵌合抗体C1-28和C2H7的构建、表达及功能检测  29-48
  2.1 材料与方法  29-36
  2.2 结果  36-44
  2.3 讨论  44-47
  2.4 小结  47-48
第三部分新型小分子抗体5S的设计、构建及免疫学功能检测  48-64
  3.1 材料与方法  49-53
  3.2 结果  53-61
  3.3 讨论  61-63
  3.4 小结  63-64
总结  64-66
参考文献  66-71
致谢  71-72
附录  72-77
  附录1 文献综述  72-77
  附录2 博士期间发表及待发表的文章目录  77

基于计算机辅助分子设计的抗CD20单克隆抗体的改造

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