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HPV58型衣壳蛋白L1和L2基因的克隆表达及病毒样颗粒的装配与免疫学分析

作　者: 王丽娜
导　师: 朱凤全
学　校: 吉林大学
专　业: 妇产科学
关键词: 人乳头瘤病毒58型主要衣壳蛋白次要衣壳蛋白病毒样颗粒杆状病毒昆虫细胞表达系统
分类号: R392
类　型: 博士论文
年　份: 2005年
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内容摘要

高危型HPV 感染与宫颈癌的发病密切相关,其中16 和58 型是我国最常见的型别。为降低高危型HPV 感染的发生率和宫颈癌的发病率,制备预防HPV 感染的疫苗势在必行。由于HPV 难以通过体外组织培养或感染动物而进行繁殖,而且天然的HPV 感染病灶中获得的HPV 颗粒量很少,不足以用于疫苗制备。分子生物学研究发现HPV 结构蛋白的Ll 蛋白或L1 +L2 蛋白在真核细胞大量表达可以自发组装成病毒样颗粒(virus-like particles, VLP) 是目前公认的最具前景的HPV 疫苗。但这种VLP 的中和活性具备型特异性,即一种型的VLP接种后只能对同型HPV 的感染起预防作用,而对其他型不起作用,因此有必要制备多型VLP。目前尚无关于HPV58 的VLP 的详细报道,针对我国HPV58感染高发的特点,本实验对HPV58-VLP 进行了详细的研究。本实验首先应用基因重组技术构建了表达HPV58L1 和HPV58L1L2 共表达的重组杆状病毒载体,感染昆虫细胞后大量表达L1、L2 蛋白并进行纯化,形成由58L1单独构成的VLP和L1L2共同构成的VLP。用它们分别免疫小鼠,制备相应的抗血清。通过ELISA 和Western-blot 方法证明了58VLP 具备良好的免疫原性,由它制备的抗血清含有针对L1 的高滴度抗体。另外,应用HPV58L1L2-VLP 重新包装pSV/?-gal 质粒制备HPV58 假病毒,通过抗血清对假病毒感染COS-1 细胞的阻断实验证实了抗血清具备特异性中和活性。关键词:人乳头瘤病毒58型主要衣壳蛋白次要衣壳蛋白病毒样颗粒杆状病毒昆虫细胞表达系统

全文目录

缩略词表  6-8
文献综述:HPV 与宫颈癌发病的关系及预防性疫苗的研究进展  8-22
前言  22-26
总体技术路线  26-27
第一章:HPV58L1、HPV58L1L2 基因重组杆状病毒表达载体的构建  27-53
  材料与方法  29-40
  结果  40-52
  小结  52-53
第二章:HPV58L1 和 HPV58L1L2 蛋白的大量表达、VLP 形成及纯化  53-67
  材料与方法  54-59
  结果  59-66
  小结  66-67
第三章:HPV58-VLP 抗血清的制备及其活性的研究  67-83
  材料与方法  68-75
  结果  75-82
  小结  82-83
讨论  83-90
结论  90-91
参考文献  91-103
攻读博士期间发表论文  103-104
中文摘要  104-108
英文摘要  108-113
致谢  113

HPV58型衣壳蛋白L1和L2基因的克隆表达及病毒样颗粒的装配与免疫学分析

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