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银杏内酯B和前胡丙素对动脉粥样硬化的防护机制及酵母双杂交实验体系筛选清道夫受体胞浆域结合蛋白

作 者: 魏恩会
导 师: 饶曼人;陈琪;范乐明
学 校: 南京医科大学
专 业: 药理学
关键词: 动脉粥样硬 前胡丙素 银杏内酯B 酵母双杂交 防护机制 实验体系 结合蛋白 体胞 道夫 SMC增殖
分类号: R285
类 型: 博士论文
年 份: 2002年
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内容摘要


动脉粥样硬化(As)是一个慢性病理过程,最近研究表明它的发展阶段始自胎儿期,一直延续到生命的终结,在这长达几十年的漫长发展过程中,多种因素参与了As的发生。正因如此,对于As的防治就需要常年、针对众多发病环节进行预防,寻找毒副作用少、价格便宜以及作用相对广泛的药物也就显得尤为重要。已知血小板活化因子(PAF)和细胞内游离钙离子水平与As的发生关系密切,而PAF受体拮抗剂银杏内酯B(GB)和钙离子内流阻断剂前胡丙素(pra-C)的原材料银杏叶与白花前胡的来源丰富,为了探索二者对As防治的药用价值,研究了GB和pra-C对牛主动脉平滑肌细胞(SMC)增殖和泡沫细胞形成的影响,并探讨了可能机制。 以3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入试验确定细胞的增殖程度,应用流式细胞术测定细胞周期,用MTT法和LDH活性测定观察药物对细胞代谢的影响。结果可见,GB、银杏内酯A和B的混合物(GA:GB)在10-9mol·L-1~10-5浓度下,可呈浓度依赖性地抑制血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导的SMC增殖,其中GB和GA:GB对细胞DNA合成量的最大抑制率分别为54.6%和69.4%,相同浓度条件下,二者作用没有明显差别,10-7mol·L-1的GB和GA:GB可分别将AngⅡ诱导增殖的SMC的细胞增殖指数由45.0%降至40.5 南京医科大学博士学位论文%和41.9%。GB和GA:GB尚可呈浓度依赖性地抑制血清单独诱导的SMC’H1dR的掺入量,降低处于有丝分裂期侣期)细胞的比例,明显抑制细胞线粒体中琉拍酸脱氢酶活性,但细胞培养上清中的乳酸脱氢酶活性则不受影响。提示,GB可以有效地抑制动脉壁SMC的增殖,其机制主要与阻止细胞进入有丝分裂期p期)有关,而与细胞毒性无关,GB的作用除了桔抗PAF受体活性外尚可能有其他机制发挥作用。Pra-l二对血清以及血清和Aug 11共同诱导的SMC增殖均呈剂量依赖性地抑札其中,对SMC’H1dR掺入量的抑制最大抑制率分别为的刁%和59刀%,同时,pr个C可明显减少两种诱导 SMC增殖模型中 S期细胞所占的比例,但不改变细胞培养上清中的LDH活力,提示通过阻止钙离子的内流,pra-C能够阻止细胞进入S期从而抑制SMC的增殖。作为阳性对照,观察了血管紧张素转换酶抑制剂体CEI)enalaprilatona购作用,结果可见ha对 Aug 11诱导 SMC增殖的抑制作用强于 GB和Wa(,其最大抑制率为 74.9%,但是,应用 Ena后,SMC培养上清中 LDH活力有升高的趋势,提示尽管GB和pra(对抗血管SMC增殖的能力不如 Ena,但是,就安全性而言,GB和 pra(可能更有应用前景。 用 50 u g·ml”‘重度修饰氧化性下密度脂蛋白(。x-LDL)与小鼠腹腔巨噬细胞共孵育48小时后,细胞内总胆固醇厂q含量即增加一倍,表明泡沫细胞模型可靠。10”儿10”’mol·L”的 GB可呈浓度依赖性地抑制细胞内TC和胆固醇酯KE)含量的增多,而对CE占TC的比值基本没有影响,提示GB可阻止细胞内胆固醇的积聚,延缓泡沫细胞的形成,但对乙酞辅酶A胆固醇酞基转移酶(ACAT的活性无影响。 2 南京医科大学博士学位论文 GB可呈剂量依赖性地抑制 MPM对重度、中度和轻度修饰的‘HslOX工DL的摄取。利用非特异吞噬抑制剂细胞松弛素Dkyt小chalasin D)处理细胞,可见MPM对三种不同程度修饰 ox工DL的摄取能力均明显降低,6 GB的应用则导致 MPM对 OX工DL的摄取量更低,提示 GB的作用可能是通过阻止细胞的受体途径。抗 CD3 6和抗CD68的抗体不能阻止MPM摄取重度OX工DL的能力,表明其不参与重度狐士DL的识别。30倍于”勺0DLDL量的多聚次黄噪吟OOly I)—一种SR-A特异性@己基,只能部分阻断OX工DL的摄取,提示除了 SR-A以外,尚可能有其他类型的膜受体参与重度OX工DL的清除。与 MPM摄取重度 OX丁DL的特性不同,MPM摄取中度和轻度修饰‘乃IOX士DL的能力均可被p*y、抗CD36或抗**68的抗体抑札提示中度和轻度修饰的狐工*L不仅可被**A识别,亦可经**36和**68进入胞 内。*B不能改变抗**36抗体和抗CD68抗体抑制MPM摄取中度和轻度OX工DL的能力,提示 GB的作用靶点可能在 CD36和 CD68;然而 GB对 polyl抑制NpM摄取重度、中度修饰 OX工DL能力的促进作用,提示 GB的作用靶点尚可能有其他膜蛋白。为进一步GB的作用是否与SRA有关,利用 RT-PCR法观察了 GB对 SR-A IRNA水平的影响,结果见 GB可有效降低 SR-A的表达水平,提示 GB亦可通过阻止职-A的摄取而发挥作用。 Pra(也能有效地抑制毗工DL的摄取,不仅可以降低细胞内胆固醇和胆固醇酯的积聚,而且能降低 MPM对重度修饰“SI似-LDL的总摄取量,但对其降解能力无影响对轻度和中度修饰’‘’1.ox工DL的清除也无作用,提示pra(不能作用于非特异吞噬及 3

全文目录


中文摘要  3-7
英文摘要  7-12
前言  12-20
第一部分 银杏内酯B前胡丙素对牛主动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用  20-41
第二部分 银杏内酯B和前胡丙素对巨噬细胞摄取氧化性低密度脂蛋白能力的影响  41-75
第三部分 酵母双杂交体系筛选A类清道夫体胞浆域结合蛋白  75-104
小结  104-105
致谢  105-106
论文一 Inhibitory effects of praeruptorin C on cattle aortic smooth muscle cell proliferation  106-110
论文二 银杏内酯B对牛主动脉平滑肌细胞增殖的影响  110-114
综述一 氧化性低密度脂蛋白研究进展  114-143
综述二 酵母双杂交实验技术进展  143-154

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学
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