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卵透明带精子受体的分子生物学研究

作　者: 曹佐武
导　师: 王自能
学　校: 暨南大学
专　业: 妇产科学
关键词: 体外受精 人工激活 卵龄
分类号: R321
类　型: 博士论文
年　份: 2001年
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内容摘要


第一部分 卵透明带精子受体受精后失活的分子机制初探 受精是生殖过程中的一个核心环节，研究受精机理，调节受精是生育调控中的一个重要途径。受精的调节主要集中在精子和卵透明带的相互识别和结合上。 透明带（ZP）是覆盖在卵细胞表面的一层糖蛋白外衣，它不仅保护卵细胞和早期胚胎，还是精卵识别和结合的主要成分，受精后卵透明带发生变化阻止多精子受精。由于透明带成分具有种族特异性和组织特异性，可用于发展避孕疫苗，阻止受精，达到孕前控制生育的目的。 透明带由 ZP1，ZP2，ZP3三种硫酸糖蛋白组成，其中ZP3是精卵结合的初级受体。ZP3的多糖侧链具有受体的活性，小鼠ZP3的精子受体活性在于糖蛋白上特异的0-连寡糖，但具体是什么糖链充当精子受体？受精后发生带反应阻断多精子受精，小鼠的0-糖链在带反应中有什么变化？作为受精前提条件的激活过程是否能引起透明带的这些变化？目前尚无明确的答案。本研究主要探讨受精和激活对作为精子受体的透明带0-糖链的影响。第一章 乙醇人工激活小鼠卵的最佳卵龄探讨实验目的 比较小鼠卵龄对体外受精和乙醇人工激活的影响，探讨乙醇激活卵母细胞的最佳卵龄。实验方祛 用PMSG和HCG对小鼠进行超数排卵，取不同卵龄的卵母细胞进行体外受精和乙醇人工激活，比较不同卵龄卵的体外受精率和人工激活率。以卵子受精后次日分裂成2-细胞作为卵细胞被激活受精的标志，以出现原核或发生速即卵裂作为被激活的标志。 实验结果 利用不同卵龄的小鼠卵母细胞进行体外受精和乙醇人工激活，比较受精 率和激活率。结果显示，小鼠卵母细胞较容易被乙醇激活，从 13h到 20h的 卵母细胞，随着卵龄的增加，激活率升高，20h 卵龄的卵母细胞的激活率达 sl．6人 但卵龄超过 20h，激活率转而下降。 卵母细胞被箱子激活受精的时间更有限，卵龄为 13—15h的卵子较容易 发生体外受精，17h后的卵母细胞的体外受箱率很低。 结论 刚排出不久（注射hCG后13l 一的卵母细胞较适合体外受精，卵龄稍大 （注射hCG后20hr前后）的卵毋细胞被乙醇处理的激活率高。提示箱子对卵 子的天然激活和乙醇对卵子的人工激活有不同的作用环节和机理。

全文目录


中文摘要  4-12
英文摘要  12-23
第一部分 卵透明带精子受体受精后失活的分子机制初探  23-61
  前言  23-32
    一、 卵透明带精子受体的研究进展  23-27
    二、 糖蛋白的结构特点  27-29
    三、 参考文献  29-32
  第一章 乙醇人工激活小鼠卵的最佳卵龄探讨  32-37
    1 实验目的  32
    2 实验材料  32
    3 溶液配制  32-34
    4 实验方法  34
    5 实验结果  34-35
    6 讨论  35-36
    参考文献  36-37
  第二章 受精和乙醇激活对透明带肽链的影响  37-51
    1 实验前准备  37-40
    2． 小鼠成熟卵、激活卵和胚胎透明带成分的制备  40-44
    3． 透明带成分的聚丙烯酰胺电泳（SDS-PAGE）分析  44-46
    4． 透明带成分的双向电泳分析  46-49
    5． 讨论  49-50
    6． 参考文献  50-51
  第三章 受精和乙醇激活对卵透明带O-糖链的影响  51-60
    1． 实验前准备  51-52
    2． 小鼠卵、胚胎和激活卵透明带O-糖链的HPLC分析  52-53
    3． 讨论  53-58
    4． 结论  58-59
    5． 参考文献  59-60
  小 结  60-61
第二部分 人ZP3精子受体相关的B细胞表位嵌合肽免疫原的基因表达  61-112
  前言  61-71
    一． 人ZP3的B细胞表位研究进展  61-64
    二． 杆状病毒表达载体系统  64-68
    三． 参考文献  68-71
  第四章 人ZP3 B-细胞表位嵌合肽DNA的设计和合成  71-78
    1． 实验目的  71
    2． 实验设计与方法  71-73
    3． 实验结果  73-74
    4． 讨论  74-76
    5． 结论  76
    6． 参考文献  76-78
  第五章 人ZP3嵌合肽基因杆状病毒表达载体的构建  78-93
    1． 实验前准备  79-81
    2． 酶切分离ZP3嵌合肽DNA片段  81-83
    3． 制备线形化的载体DNA  83-85
    4． 连接和转化  85-86
    5． 重组子筛选  86-87
    6． PCR扩增重组质粒的ZP3嵌合肽DNA片段  87-89
    7． 制备重组质粒  89-90
    8． 结论  90
    9． 参考文献  90-93
  第六章 ZP3嵌合肽重组基因在昆虫细胞中表达  93-111
    1． 实验前准备  94-96
    2． 重组病毒的制备和感染  96-101
    3． Tricine-SDS-PAGE检测ZP3嵌合肽基因的表达产物  101-103
    4． 小分子肽的Tricine-SDS-PAGE分离方法的优化  103-107
    5． 讨论  107-108
    6． 参考文献  108-111
  小结  111-112
第三部分、 重组人ZP3 B-细胞表位嵌合肽的活性研究  112-124
  第七章 重组人ZP3嵌合肽的免疫原性研究  113-122
    1． 抗人ZP3嵌合肽抗血清的制备  113-115
    2． 人卵巢组织标本切片的制作  115-117
    3． 人ZP3嵌合肽抗血清的酶免疫细胞化学分析  117-120
    4． 讨论  120-121
    5． 参考文献  121
    6． 结论  121-122
  总结  122-124
英文缩写词  124-126
在读期间发表的论文  126-127
致谢  127

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 人体形态学 > 人体胚胎学（人体胎生学、发生学）
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