学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

dsRNA介导的烟草和番茄抗病毒基因工程研究

作 者: 胡琼
导 师: 周雪平
学 校: 浙江大学
专 业: 生物化学与分子生物学
关键词: 黄瓜花叶病毒 烟草花叶病毒 转基因烟草 RNA沉默 dsRNA siRNA
分类号: Q78
类 型: 博士论文
年 份: 2010年
下 载: 216次
引 用: 1次
阅 读: 论文下载
 

内容摘要


本研究以在植物体内转录出RNA沉默的高效诱导因子-dsRNA为目标,在已有的表达黄瓜花叶病毒(CMV)部分复制酶基因和烟草花叶病毒(TMV)部分移动蛋白基因的dsRNA的T0代转基因烟草基础上对其后续4代转基因烟草进行了抗病性及抗性机制分析。挑选转CMV部分复制酶基因的转基因烟草T0代抗病株系和感病株系的种子,对其T1代幼苗进行Southern blot检测,结果发现不同抗性株系间的拷贝数均存在很大差别,且抗病性与拷贝数不存在相关性。对T1代幼苗的抗性测定发现,T0代为免疫型的植株在T1代时其抗病性发生分化,免疫型与感病型的比率约为1:1-3:1。T1代株系中挑选四个抗病株系和一个感病株系,通过自花授粉得到T1代种子,播种后的T2代幼苗在四叶期时摩擦接种CMV,结果显示抗病株系接种CMV后不发病,而感病株系和非转基因对照的发病率是100%,说明T2代转基因烟草免疫株系的抗病性是稳定的。对T2代烟草Southern blot检测表明,T2抗病株系Rep15-1-1,Rep15-1-61等为单拷贝株系。从自花授粉得到的免疫型T3代中选择了Rep15-1-1-15、Rep15-1-1-26、Rep15-30-23-27,对其T4代的抗性测定表明,转基因烟草中检测不到病毒。选择了抗性强且遗传性稳定的Rep15-1-1-15株系,接种病毒后测定其T4代各三株转基因烟草中的病毒RNA和siRNA,结果表明转基因烟草在接种前后均能检测到信号很微弱的CMV RNA,而非转基因烟草接种病毒后存在大量的CMV RNA;转基因烟草中均能检测到24 nts和21 nts两种类型的siRNA,且两种siRNA信号强度差别不大,而非转基因烟草在接种前后均检测不到siRNA.以上结果表明,转基因烟草的抗性是通过基因沉默降解病毒RNA而产生的。将转基因烟草T4代株系部分幼苗分别放于15℃和24℃的光照培养箱中,接种CMV后对其CMV RNA和siRNA积累进行了测定,结果显示在低温(15℃)下转基因烟草对CMV仍然具有抗性,基因沉默效率不受影响。挑选转TMV部分移动蛋白基因的转基因烟草T0代抗病株系和感病株系种子,对其T1代幼苗进行Southern blot检测,结果表明T0代不同抗性株系间的拷贝数均存在很大差别,抗病性与拷贝数不存在相关性。对T1代幼苗的抗性测定发现,T0代为免疫型的植株在T1代时其抗病性发生分化,免疫型与感病型的比率约为1:1-3:1。T2代幼苗对TMV的抗性测定表明,T2代转基因株系能抗TMV。对T2代烟草Southern blot检测表明,T2抗病株系MP16-17-14,MP16-17-29,MP53-52-7等为单拷贝株系。对其T4代的抗性测定表明,转基因烟草中检测不到病毒。选择了抗性强且遗传性稳定的MP16-17-29-9株系,接种病毒后测定其T4代各三株转基因烟草中的TMV RNA和siRNA,结果表明转基因烟草在接种前后均能检测到信号很微弱的TMV RNA,而非转基因烟草接种病毒后存在大量的TMV RNA;转基因烟草中均能检测到24 nts和21 nts两种类型的siRNA,而非转基因烟草在接种前后均检测不到siRNA.说明了转基因烟草的抗病性主要是通过基因沉默降解病毒RNA而产生的。进一步测定表明在低温(15℃)下T4代转基因烟草对TMV依旧有很好的抗性。将含部分CMV Rep (i/r)基因的农杆菌与番茄叶盘共培养,经卡那霉素抗性筛选获得转部分CMV Rep (i/r)基因的再生植株,PCR检测发现在随机抽取的转基因番茄中均能扩增到特异性条带,点杂交也均能杂到特异信号,说明获得了转部分CMV-Rep基因的转基因番茄,对其抗病性进行了初步研究。

全文目录


相似论文

  1. 超表达OsSsr1基因烟草的获得及其抗逆性分析,S572
  2. 利用RNA瞬时干扰技术研究甘油二酯激酶基因在水稻响应激发子木聚糖酶和盐处理中的作用,S511
  3. 新型含氟化合物的合成及对TMV的诱导抗性研究,S435.72
  4. 转小麦类蛋白激酶基因TA50-10烟草及其抗病性分析,S572
  5. 转hrfl基因小麦赤霉病抗性分析与水稻RNA沉默通用载体构建,S512
  6. 不结球白菜抗坏血酸合成相关基因的克隆与表达及BcPMI2的功能分析,S634.3
  7. 青枯菌PopW蛋白诱导植物抗病功能研究及其转基因烟草的构建,S572
  8. 荷花液泡膜型Na~+/H~+逆向转运蛋白基因NnNHX1的克隆及转基因烟草耐盐性的初步分析,S682.32
  9. RNAi沉默TTF-1表达对肺癌A549细胞凋亡影响的实验研究,R734.2
  10. 真核表达CatSper1用于筛选有效siRNA的体外实验研究,R346
  11. 雌激素介导ERα调控子宫内膜间质细胞β-catenin表达的分子机制及在子宫内膜异位症形成和发展中的意义,R711.71
  12. 人巨细胞病毒影响滋养细胞B7-H1表达水平的体外实验研究,R714.2
  13. 抗烟草花叶病毒药物筛选及作用机制初步研究,S482.2
  14. 氧化应激中热休克蛋白90对20S蛋白酶体功能的影响,R363
  15. 家蚕三磷酸腺苷结合盒转运子的鉴定及部分成员的克隆与功能分析,S881
  16. 靶向Survivin基因的siRNA对结肠癌作用的实验研究,R735.35
  17. 靶向MIF的siRNA对小鼠大肠癌肝转移的影响,R735.34
  18. 新疆加工番茄抗黄瓜花叶病毒转基因技术的研究,Q943.2
  19. 小鼠abcg4基因的克隆、组织表达及RNA干涉的研究,Q78
  20. 天山北坡加工番茄病毒病主要病毒及其动态的分子检测,S436.412.1
  21. 转基因创建矮牵牛、烟草早花种质资源的研究,S572

中图分类: > 生物科学 > 分子生物学 > 基因工程(遗传工程)
© 2012 www.xueweilunwen.com