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芍药苷对黑素瘤A375增殖及NF-κ-B影响的研究

作　者: 张建青
导　师: 李建军
学　校: 汕头大学
专　业: 皮肤性病学
关键词: 芍药苷 黑素瘤 增殖抑制率 p16INK4a 核因子-κB
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的探讨不同浓度芍药苷(paeoniflorin,PF)对人黑素瘤细胞株A375细胞增殖抑制率、细胞凋亡率的影响以及对该细胞株p16INK4a、p14INK/ARF、核因子-κB(NF-κB)亚基p65的mRNA水平的影响,为其临床应用及进一步深入研究提供基础。方法以A375细胞为研究对象,设定空白对照组及5个相应实验组,芍药苷含量分别为0、0.01 mg/ ml、0.1 mg/ ml、0.5 mg/ ml、1.0 mg/ ml、2.0 mg/ ml培养液处理(芍药苷纯度≥92%)。①倒置显微镜观察各组细胞密度及形态的变化;②MTT比色法检测在干预24、48和72小时后各浓度药物对A375细胞的增殖抑制率的作用;③Annexin V/ PI试剂盒染色后,采用流式细胞仪检测在干预24小时后各浓度药物对A375细胞的早期凋亡率的影响;④SYBR Green- PCR检测在干预24、48和72小时后各组A375细胞p16INK4a、p14INK/ARF、NF-κB亚基p65的mRNA水平的影响。结果1、倒置显微镜观察显示芍药苷能抑制A375细胞的生长,随着浓度的增大其密度减小,细胞逐渐呈现短而粗的树枝状胞体,而不是正常的细长样核周体和双极树突样胞体。2、MTT结果显示芍药苷能抑制A375细胞的增殖,且其抑制作用呈浓度依赖性,而无时间依赖性。3、Annexin V/PI染色法-流式细胞仪结果显示各组中A375细胞的早期凋亡率无显著差异(P>0.05)。4、SYBR Green-PCR结果显示:①芍药苷能促进A375细胞p16INK4a的mRNA转录水平,与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05),且其促进作用呈浓度依赖性,而无时间依赖性;②芍药苷能抑制A375细胞中NF-κB亚基p65的mRNA转录,与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05),且其抑制作用呈浓度依赖性,而无时间依赖性;③芍药苷对A375细胞p14INK/ARF的mRNA水平无明显影响(P>0.05)。结论1、芍药苷能抑制A375的增殖,且呈浓度依赖性而无时间依赖性;但其对A375细胞凋亡无明显影响,可能与黑素瘤的诱导耐受性或肿瘤来源不同有关。2、芍药苷能促进A375 p16INK4a的表达,抑制NF-κB亚基p65,且这种作用呈浓度依赖性而无时间依赖性;但其对p14INK/ARF的转录无明显影响。由此推测,芍药苷对A375的增殖抑制作用可能通过促进p16INK4a,抑制NF-κB亚基p65表达而实现的。

全文目录


中文摘要  3-5
Abstract  5-7
符号表（缩略语）  7-11
第一章 前言  11-17
  1.1 研究背景  11-15
    1.1.1 恶性黑素瘤的简介及治疗现状  11-12
    1.1.2 核因子-κB 信号通路的简介  12-13
    1.1.3 核因子-κB 与黑素瘤的关系  13-14
    1.1.4 p16INK4a、p14 INK/ARF 和 NF-κB 的关系  14
    1.1.5 黑素瘤增殖凋亡的研究现状  14-15
    1.1.6 芍药苷抗肿瘤作用的研究现状  15
  1.2 研究意义  15-16
  1.3 研究课题经费的来源  16
  1.4 研究内容  16-17
第二章 材料与方法  17-27
  2.1 实验材料  17-20
    2.1.1 细胞来源  17
    2.1.2 引物合成  17
    2.1.3 主要试剂  17-18
    2.1.4 主要仪器  18-19
    2.1.5 主要耗材  19-20
  2.2 实验方法  20-27
    2.2.1 人恶性黑素瘤细胞株A375 的培养  20-22
    2.2.2 含不同浓度芍药苷培养液的配制  22-23
    2.2.3 细胞计数法  23
    2.2.4 芍药苷对人黑素瘤细胞株 A375 的增殖抑制和细胞凋亡的影响  23-24
    2.2.5 芍药苷对 A375 中 p16INK4a、p14INK/ARF、NF-κB 亚基 p65 转录的影 响  24-26
    2.2.6 数据处理和统计学分析  26-27
第三章 结果与分析  27-34
  3.1 芍药苷对人黑素瘤细胞株 A375 的增殖抑制和细胞凋亡的影响  27-30
    3.1.1 形态学观察  27-28
    3.1.2 芍药苷抑制 A375 细胞的增殖  28-29
    3.1.3 芍药苷对 A375 细胞凋亡无明显影响  29-30
  3.2 芍药苷对 A375 中 p16INK4a、p14INK/ARF、NF-κB 亚基 p65 转录的 影响  30-34
    3.2.1 芍药苷促进 A375 细胞 p16INK4a 的转录  30-31
    3.2.2 芍药苷抑制 A375 细胞 NF-κB 亚基p65 的转录  31-33
    3.2.3 芍药苷对 A375 细胞 p14INK/ARF 转录的水平无明显影响  33-34
第四章 讨论  34-38
  4.1 芍药苷对人黑素瘤细胞株 A375 的增殖抑制和细胞凋亡的影响  34-35
  4.2 芍药苷对A375 中 p16INK4a、p14INK/ARF、NF-κB 亚基 p65 转录的 影响  35-36
  4.3 结论  36-38
参考文献  38-42
附录1 文献综述1  42-48
  参考文献  46-48
附录2 文献综述2  48-53
  参考文献  51-53
附录3 在校期间已发表及待发表的文章  53-54
附录4 实验相关数据  54-58
个人简历  58-60
致谢  60

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学
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