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NKT细胞对C57BL/6小鼠胚胎着床和发育的影响及其免疫机制的初步研究

作　者: 吴圣娇
导　师: 王晶磊
学　校: 南昌大学
专　业: 生理学
关键词: IL-10 NKT细胞 Th1/Th2 TNF-α 子宫内膜 胚胎着床
分类号: R321
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的：为了探究NKT细胞对C57BL/6小鼠胚胎着床和发育的影响及其可能的免疫机制,通过刺激NKT细胞增殖活化,观察胚胎着床及发育情况,同时检测其分泌的细胞因子IL-10和TNF-α变化,以分析其在母体子宫内膜免疫微环境中的调节作用。方法：1、在小鼠胚胎着床前后的不同时间腹腔注射不同浓度的抗原KRN7000刺激NKT细胞活化,整体观察胚胎着床和发育情况。2、在小鼠胚胎着床前后的不同时间腹腔注射不同浓度的抗原KRN7000刺激NKT细胞活化,用RT-PCR法半定量检测NKT细胞活化后子宫蜕膜组织中IL-10和TNF-αmRNA的表达量。结果：1、分别给妊娠D3(着床前一天)和妊娠D6(着床后)小鼠腹腔注射不同浓度(0,1.25,2.5,5μg/ml)的抗原KRN7000每只0.4m1,于妊娠D8观察着床胚胎数及其发育情况,结果显示于妊娠D3给药后,各实验组胚胎着床数减少,与对照组相比存在显著差异(P<0.05),着床后的胚胎发育不良,但不同实验组之间不存在显著差异(P>0.05)。于妊娠D6给药后,各实验组均诱导胚胎流产,胚胎吸收率均达100%。2、分别给妊娠D3和妊娠D6小鼠腹腔注射不同浓度(0,1.25,2.5,5μg/ml)的抗原KRN7000每只0.4m1,用RT-PCR技术检测给药后一天不同实验组子宫蜕膜组织中IL-10的mRNA表达。结果显示妊娠D4(着床日)小鼠中,各实验组子宫蜕膜组织中IL-10的mRNA表达均明显低于对照组,差异有显著性(P<0.05)；而不同实验组间IL-10的mRNA表达差异无显著性(P>0.05)。妊娠D7天小鼠中,各实验组子宫蜕膜组织中IL-10的mRNA表达也明显低于对照组,差异有显著性(P<0.05)；而不同实验组间IL-10的mRNA表达差异无显著性(P>0.05)。3、分别给妊娠D3和妊娠D6小鼠腹腔注射不同浓度(0,1.25,2.5,5μg/ml)的抗原KRN7000每只0.4ml,用RT-PCR技术检测给药后一天不同实验组子宫蜕膜组织中TNF-α的mRNA表达。结果显示妊娠D4,实验组各组中TNF-α的mRNA表达明显低于对照组,差异有显著性(P<0.05)；而不同实验组间TNF-α的mRNA表达差异无显著性(P>0.05)；妊娠D7小鼠中,各实验组TNF-α的mRNA表达高于对照组,但1.25μg/ml和2.5μg/ml浓度组与对照组比较差异有显著性(P<0.05),而5μg/ml浓度组与与对照组比较差异无显著性(P>0.05)。4、通过分析妊娠D4和妊娠D7小鼠的子宫蜕膜TNF-α/IL-10的相对光密度比值,结果显示在妊娠D4小鼠中各实验组TNF-α/IL-10的相对光密度比值高于对照组,1.25μg/ml和5μg/ml浓度组与对照组比较差异有显著性(P<0.05),而2.5μg/ml浓度组与对照组比较差异无显著性(P>0.05),5μg/ml浓度组比值高于其他三组,差异具有显著性(P<0.05)。在妊娠D7小鼠各实验组TNF-α/IL-10的相对光密度比值显著高于对照组(P<0.05),但各实验组之间无显著性差异(P>0.05)。结论：1、在胚胎着床前激活NKT细胞可使着床胚胎数减少和胚胎发育不良；在着床后激活NKT细胞则可促使胚胎流产。2、着床后子宫蜕膜中TNF-α的过量表达将影响胚胎发育,促使胚胎流产。3、在胚胎着床前后,子宫内膜中活化的NKT细胞使Thl/Th2 (TNF-α/IL-10)的比值向Thl漂移,不利于子宫内膜局部形成免疫耐受的微环境,从而影响胚胎着床和妊娠维持。

全文目录


摘要  3-5
ABSTRACT  5-10
第1章 引言  10-12
第2章 材料和方法  12-16
  2.1 材料  12-13
    2.1.1 实验动物  12
    2.1.2 试剂  12-13
      2.1.2.1 试剂  12
      2.1.2.2 引物合成  12-13
    2.1.3 主要仪器  13
  2.2 方法  13-15
    2.2.1 动物模型的制备  13-14
    2.2.2 KRN7000对小鼠胚胎着床和发育的影响  14
    2.2.3 RT-PCR检测子宫蜕膜中TNF-α和IL-10 mRNA的表达  14-15
      2.2.3.1 实验分组  14
      2.2.3.2 提取小鼠子宫蜕膜中总RNA  14
      2.2.3.3 RNA逆转录  14-15
      2.2.3.4 PCR扩增  15
      2.2.3.5 琼脂糖凝胶电泳及分析  15
  2.3 统计学分析  15-16
第3章 结果  16-25
  3.1 KRN7000对小鼠胚胎着床和发育的影响  16-17
    3.1.1 妊娠D3给药后小鼠的着床胚胎数及胚胎发育情况  16-17
    3.1.2 KRN7000对早孕小鼠胚胎的影响  17
  3.2 KRN7000对妊娠D4子宫蜕膜中IL-10和TNF-αmRNA表达的影响  17-20
    3.2.1 KRN7000对妊娠D4子宫蜕膜组织中IL-10 mRNA表达的影响  17-19
    3.2.2 KRN7000对妊娠D4子宫蜕膜组织中TNF-α mRNA表达的影响  19-20
  3.3 KRN7000对妊娠D7子宫蜕膜中IL-10和TNF-α mRNA表达的影响  20-23
    3.3.1 KRN7000对妊娠D7子宫蜕膜组织中IL-10的mRNA表达的影响  20-22
    3.3.2 KRN7000对妊娠D7子宫蜕膜组织中TNF-α的mRNA表达的影响  22-23
  3.4 NKT细胞活化后TNF-α/IL-10比值的变化  23-25
    3.4.1 不同浓度抗原激活NKT细胞后,妊娠D4 TNF-α/IL-10的变化  23-24
    3.4.2 不同浓度抗原激活NKT细胞后,妊娠D7 TNF-α/IL-10的变化  24-25
第4章 讨论  25-29
  4.1 NKT细胞对胚胎着床的意义  25
  4.2 NKT细胞对着床前后子宫蜕膜中IL-10和TNF-α分泌的影响  25-27
  4.3 NKT细胞对小鼠子宫蜕膜中TH1/TH2平衡的影响  27-29
第5章 结论  29-30
致谢  30-31
参考文献  31-34
攻读学位期间研究成果  34-35
综述 细胞因子对胚胎着床影响的研究进展  35-42
  参考文献  40-42

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 人体形态学 > 人体胚胎学（人体胎生学、发生学）
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