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微囊化兔坐骨神经组织/细胞移植对脊髓损伤大鼠比目鱼肌FasL及Caspase-3表达的影响

作　者: 刘卉芳
导　师: 刘德明
学　校: 南昌大学
专　业: 人体解剖与组织胚胎学
关键词: 微囊 脊髓损伤 异种移植 骨骼肌 FasL caspase-3
分类号: R651.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的：通过观察和分析微囊化兔坐骨神经组织／细胞移植治疗脊髓损伤对患侧比目鱼肌微观形态及凋亡相关蛋白FasL及caspase-3表达的影响,探讨微囊化异种坐骨神经组织／细胞移植对脊髓损伤修复的可能机制。方法：取健康成年家兔8只,体重3000g-3500g,雌雄不拘；SD大白鼠80只,体重250g-325g,雌雄不拘。无菌条件下取经预变性处理的成年家兔的双侧坐骨神经干经胰酶消化制成组织／细胞悬液,与1.5%海藻酸钠溶液充分混匀并喷入20mmol/L的氯化钡盐溶液中,制成微囊化兔坐骨神经组织／细胞悬液备移植。将SD大鼠随机分为4组：正常组8只；微囊化兔坐骨神经组织／细胞移植组(微囊化组)24只；兔坐骨、神经组织／细胞移植组(实验对照组)24只；损伤对照组24只。正常组未做任何处理。微囊化组、实验对照组及损伤对照组建立大鼠T10脊髓左半横断损伤模型,并分别在损伤处植入明胶海绵吸附的10μ1微囊化兔坐骨神经组织/细胞悬液、10μ1兔坐骨神经组织／细胞悬液及空明胶海绵。于术后1d、3d、7d、14d(各时相随机取6只)取大鼠患侧比目鱼肌肌腹,正常组(每个时相随机取2只大鼠)取相应部位的比目鱼肌肌腹。应用H-E染色观察肌细胞微观形态,免疫组织化学显色观察比目鱼肌凋亡相关蛋白FasL及caspase-3的表达情况。结果：H-E染色：正常组可见比目鱼肌纤维结构清晰,排列整齐。微囊化组肌纤维始终萎缩不明显,胞质、胞核较清晰。实验对照组、损伤对照组脊髓半切损伤后3d即可见肌纤维萎缩、断裂,胞膜不完整,排列疏松紊乱,胞浆淡染,细胞核深染,大小不一,排列紊乱,部分细胞内出现脂肪空泡。7d-14d肌组织萎缩、变性更加明显。免疫组织化学显色：正常组比目鱼肌不见FasL及caspase-3表达,实验对照组、单纯损伤组脊髓半切损伤后1d,比目鱼肌内出现FasL及caspase-3阳性表达,逐渐增多,至第7天达高峰,14d维持在高峰水平。微囊化组FasL及caspase-3的表达1d开始出现,3d最高,7d降低,14d近正常水平；且微囊化组的阳性平均光密度值与同时间点的实验对照组及单纯损伤组比较异均有显著性差异(P<0.01),而实验对照组与单纯损伤组各时间点的差别比较无统计学意义(P>0.05)。结论：微囊化兔坐骨神经组织／细胞移植治疗脊髓损伤对比目鱼肌FasL及caspase-3的表达有抑制作用并可延缓肌纤维萎缩。

全文目录


摘要  3-5
ABSTRACT  5-9
第1章 引言  9-11
第2章 材料和方法  11-17
  2.1 主要的试剂和仪器  11-12
    2.1.1 主要的试剂  11
    2.1.2 主要的仪器  11-12
    2.1.3 实验动物  12
  2.2 实验方法  12-15
    2.2.1 兔坐骨神经的取材及组织/细胞悬液的制备  12
    2.2.2 微囊化兔坐骨神经组织/细胞悬液的制备  12
    2.2.3 制作大鼠脊髓损伤模型(脊髓左侧半横断法)  12-13
    2.2.4 动物分组及移植操作  13
    2.2.5 大鼠心脏灌注与比目鱼肌标本取材  13-14
    2.2.6. H-E染色  14
    2.2.7 FasL免疫组化染色检测(SP法)  14-15
    2.2.8 Caspase-3免疫组化染色检测(SP法)  15
  2.3 切片观察、分析  15-16
    2.3.1 H-E染色切片  15-16
    2.3.2 免疫组化染色切片  16
  2.4 统计学处理  16-17
第3章 结果  17-21
  3.1 移植物的制备情况  17
  3.2 H-E染色结果  17
  3.3 免疫组化染色结果  17-21
第4章 讨论  21-27
  4.1 骨骼肌与脊髓损伤  21-22
  4.2 雪旺细胞与脊髓损伤修复  22-23
  4.3 微囊技术  23-24
  4.4 FasL与caspase-3在骨骼肌中表达及意义  24-27
第5章 结论与展望  27-28
  5.1 结论  27
  5.2 实验的不足之处及进一步工作方向  27-28
致谢  28-29
参考文献  29-33
附图  33-38
攻读学位期间的研究成果  38-39
综述  39-45
  参考文献  43-45

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中图分类: > 医药、卫生 > 外科学 > 外科学各论 > 头部及神经外科学 > 脊髓
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