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利多卡因治疗大鼠SAH后迟发性脑血管痉挛及神经细胞损伤的实验研究

作　者: 陈博文
导　师: 付爱军
学　校: 河北联合大学
专　业: 神经外科学
关键词: 蛛网膜下腔出血迟发性脑血管痉挛利多卡因细胞凋亡神经细胞损伤
分类号: R743.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:采用清洁级SD大鼠枕大池二次注血模型从枕大池给以利多卡因在不同时间观察脑血管痉挛以及神经细胞的改变,以期了解利多卡因对蛛网膜下腔出血后迟发性脑血管痉挛及海马CA1区神经细胞细胞是否有预防及保护作用。为蛛网膜下腔出血的脑血管迟发性痉挛的防治提供一个新的途径。方法:1.选72只健康雄性SD大鼠,体重280～320g,饲养1周无异常后用于实验。将实验动物随机分为:正常对照组(18只),假手术组(18只),蛛网膜下腔出血对照组(18只),利多卡因注射组(18只)。2.建立蛛网膜下腔出血动物模型,采用枕大池二次注入自体动脉血法制备模型与第二次注血后30分钟后假手术组和蛛网膜下腔出血组的动物再次注入0.1ml生理盐水,而利多卡因注射组注入0.1ml 2%利多卡因,缝合消毒切口。制备成SAH模型。随后大鼠放回鼠笼中,保温饲养。自由进食水。分别于利多卡因注射后3d、5d、7d(每次每组各6只),将模型(鼠)灌注,开颅取脑。置于4%多聚甲醛液中保存。3.各种检测方法3.1通过HE染色在广镜下观察海马CA1区神经细胞及基底动脉的大体结构改变,从而观察局部细胞的形态变化。3.2通过焦油紫染色了解海马CA1区神经细胞的凋亡变化。3.3采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法。测定脑海马CA1区凋亡神经细胞。3.4采用电镜观察海马CA1区神经细胞内各个细胞器的超微结构变化。3.5通过免疫组化测定海马CA1区Bax、bcl-2凋亡相关因子的改变。3.6通过图像分析系统计算基底动脉血管内径周长及血管壁厚度,并观察血管结构变化。结果:1.大鼠海马区HE染色结果:正常对照和假手术组可见到正常神经细胞的形态,神经细胞染色清晰,排列规则整齐,形态完整,细胞核大而圆,着色较浅,位于细胞中央,偶见嗜酸性核仁,胞体、轴突、树突都清晰可见,胞浆丰富、均匀。蛛网膜下腔出血对照组神经细胞结构十分疏松,呈现筛网状改变,绝大多数细胞破裂,胞核大量溶解,且第二次注血后第3天、第5天、第7天可见破裂细胞及胞核溶解的数量逐渐增多。利多卡因注射组可见神经细胞核破裂成碎片,但与蛛网膜下腔出血对照组比较,数量减少,周围区细胞细胞形态基本可辨。且注射利多卡因后第7天较第3天及第5天异常细胞数量减少明显。2.焦油紫染色:正常对照组和假手术组大鼠海马神经细胞结构清晰,排列整齐,胞浆被染成淡紫色,胞核不着色,核仁着色。蛛网膜下腔出血对照组大鼠海马神经细胞大量形态变形,细胞固缩变小,胞浆呈深紫色,核仁消失,出现大量凋亡细胞。利多卡因注射组海马区神经细胞结构紊乱,细胞减少,有少量细胞形态变形,固缩变小,胞浆深染。3. TUNEL检测法观察结果:正常对照组可见海马神经细胞排列整齐,细胞核为浅绿色均匀荧光,胞核形状为椭圆形或圆形,个别细胞出现核边缘化和核周局部高亮荧光现象呈环状。假手术组与正常对照组比较无明显变化。蛛网膜下腔出血对照组和利多卡因注射组比较,随着时间的延长凋亡细胞逐渐增多,而利多卡因注射组则相对的凋亡细胞减少。蛛网膜下腔出血对照组(3d、5d)和利多卡因注射组(3d、5d)相同时相组比较有统计学意义(P<O.05)。4.大鼠神经细胞透射电子显微镜观察结果:正常对照组与假手术组细胞核及线粒体未见异常。蛛网膜下腔出血对照组和利多卡因注射组各时相的神经细胞核及线粒体都发生了明显的变化,且出血对照组较利多卡因注射组各时相细胞核及线粒体损伤的严重,尤以第7天明显。5.大鼠海马区Bax和Bcl-2的表达:正常对照组和假手术组的bax表达为低表达,bcl-2为高表达,且这两组比较没有统计学意义(P>O.05)。而蛛网膜下腔出血对照组(第3天)开始bax表达增强,第5天、第7天的表达均为高表达,阳性细胞数增多且染色增强;Bcl-2表达从3天开始表达逐渐减低。与正常对照组和假手术组相比较蛛网膜下腔出血对照组各时相组均有统计学意义(P<O.01)。利多卡因注射组(第3天)开始Bcl-2表达增强,第5天、第7天的表达均为高表达,阳性细胞数增多且染色增强;Bax表达从3天开始表达逐渐减低。与正常对照组和假手术组相比利多卡因注射组各时相组均有统计学意义(P<O.01),并且与蛛网膜下腔出血对照组(5d、7d)与利多卡因注射组(5d、7d)相同时相相比有统计学意义(P<O.05),bax表达减低,bcl-2表达增强,其中尤以第7天bax减低明显,bcl-2增强明显。6.大鼠基底动脉HE染色:正常对照组和假手术组基底动脉管腔呈圆形或椭圆形,未见管壁皱褶,管腔面积大,直径长;蛛网膜下腔出血组管腔不规则,管壁皱褶,管腔收缩明显,面积小,管壁增厚,管腔直径短;利多卡因注射组管腔较规则,管壁有皱褶,管壁收缩较轻。正常对照组和假手术组基底动脉内径周长和管壁厚度的两组比较没有统计学意义(P>O.05)。而蛛网膜下腔出血对照组从第3天开始内径周长逐渐减小,管壁厚度逐渐增加。利多卡因注射组从第3天开始内径周长逐渐增长,管壁厚度逐渐减小。蛛网膜下腔出血对照组(5d、7d)与利多卡因注射组(5d、7d)相同时相相比有统计学意义(P<O.05)。结论:1、利多卡因可缓解SAH后迟发性脑血管痉挛。2、利多卡因能减轻大鼠海马CA1区神经细胞的损伤,有较明显的脑保护作用。3、利多卡因可降低SAH后海马CA1区神经细胞Bax基因的表达,相对增强海马CA1区神经细胞Bcl-2基因的表达,减少海马CA1区神经细胞的凋亡。4、由于蛛网膜下腔出血后神经细胞损伤的机制不仅局限于迟发性脑血管痉挛,还有可能是一些化学物质的刺激,故利多卡因可能还有其他的保护机制,有待于进一步研究。5、由于本实验只对SAH后7天内基底动脉及神经组织的变化进行了研究,对于利多卡因是否对更长时间内的脑血管痉挛、神经细胞损伤及神经功能等方面有预防及治疗效果,还需进一步的研究。

全文目录

中文摘要  4-7
英文摘要  7-11
英文缩略词表  11-12
前言  12-14
材料和方法  14-20
结果  20-27
讨论  27-35
小结  35-36
创新与不足  36-37
参考文献  37-42
附图  42-51
综述  51-59
  参考文献  56-59
致谢  59-60
个人简历  60

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