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黄瓜离体雌核发育诱导单倍体及其DH群体SSR标记图谱构建

作　者: 裴晓利
导　师: 李胜；王建设
学　校: 甘肃农业大学
专　业: 植物发育生物学
关键词: 黄瓜辐射花粉未授粉子房单倍体 SSR标记遗传图谱
分类号: S642.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

单倍体是体细胞遗传研究和突变育种的理想材料。由单倍体加倍产生纯合二倍体(即DH系)是不分离群体,是AFLP,RELP,RAPD,SSR等分子标记和基因图谱研究的极好材料。本研究通过雌核发育途径诱导黄瓜单倍体,同时由辐射花粉授粉技术诱导获得的DH系为作图群体,利用SSR标记构建黄瓜遗传图谱,结果如下:1.以29个黄瓜不同基因型为材料,研究了基因型对辐射花粉诱导单倍体的影响;结果表明:29个不同基因型的单倍体诱导率变异幅度为0.18-2.20,平均为0.76,11个基因型单倍体诱导率在0.5-1之间,占基因型总量的37.93%,10个基因型单倍体诱导率在0.18-0.5之间,占基因型总量的34.48%;说明基因型对辐射花粉诱导单倍体的影响存在较大差异。2.研究了基因型、TDZ和AgNO3对黄瓜离体雌核发育诱导单倍体的影响。结果表明:不同基因型黄瓜品种对雌核发育启动率的影响存在差异,其变异幅度在65.52%-93.33%之间;诱导培养基添加TDZ有助于启动雌核发育,其最适浓度为0.08mg/L ;诱导培养基添加AgNO3有助于提高胚珠启动率,其最适浓度为5mg/L。试验共获得10株再生植株,流式细胞仪鉴定8株为单倍体,2株为二倍体。3.以两个黄瓜栽培品种的自交系PK281和PK282为作图亲本,利用75个DH系为作图群体,采用SSR标记构建黄瓜分子遗传图谱。图谱由5个连锁群组成,覆盖基因组长度187.963cM,标记间的平均距离为17.35cM。最大间距为14.914cM,连锁群长度为17.038-71.605cM,标记位点数3-29,平均标记间距为6.39-31.99cM。有61.19%(67个位点中有41个)的分子标记位点出现偏分离,并在统计上达到显著或极显著水平。

全文目录

英文缩写一览表  2-5
摘要  5-6
Summary  6-8
第一章文献综述  8-27
  1.1 离体雄核发育  8-10
  1.2 离体雌核发育  10-17
    1.2.1 未授粉子房(胚珠)离体培养诱导单倍体  10-17
      1.2.1.1 影响未授粉子房培养的主要因素  11-15
        1.2.1.1.1 供体基因型  12
        1.2.1.1.2 外植体的发育程度  12
        1.2.1.1.3 接种前的预处理  12-13
        1.2.1.1.4 培养基  13-15
      1.2.2.1 辐射花粉授粉诱导的雌核发育的影响因素  15-17
        1.2.2.1.1 基因型  15
        1.2.2.1.2 授粉季节的影响  15-16
        1.2.2.1.3 辐射源及剂量  16
        1.2.2.1.4 离体挽救  16
        1.2.2.1.5 生理状态  16-17
  1.3 葫芦科作物染色体倍性鉴定  17-19
    1.3.1 直接鉴定法  17
    1.3.2 间接鉴定法  17
    1.3.3 流式细胞仪鉴定法  17
    1.3.4 形态学鉴定法  17-18
    1.3.5 叶片保卫细胞叶绿体记数法  18-19
  1.4 分子遗传图谱的构建  19-24
  1.5 确定用于产生作图群体的亲本组合  24
  1.6 作图群体的选择  24-25
  1.7 作图软件  25
  1.8 黄瓜遗传图谱的研究进展  25-26
  1.9 本研究的目的和意义  26-27
第二章基因型对黄瓜辐射花粉诱导单倍体的影响  27-33
  2.1 材料和方法  27-29
    2.1.1 材料  27
    2.1.2 主要仪器  27-29
  2.2 结果与分析  29-31
    2.2.1 离体胚培养  29
    2.2.2 再生植株倍性鉴定  29-30
    2.2.3 单倍体植株的形态特征  30
    2.2.4 基因型对单倍体诱导率的影响  30-31
  2.3 结论与讨论  31-33
第三章黄瓜离体雌核发育诱导单倍体的影响因素研究  33-41
  3.1 材料和方法  33-34
    3.1.1 材料  33
    3.1.2 方法  33-34
  3.2 结果与分析  34-39
    3.2.1 离体雌核发育诱导单倍体的影响因素  34-36
    3.2.2 间接途径诱导再生植株  36-37
    3.2.3 直接途径诱导再生植株  37-39
  3.3 结论与讨论  39-41
    3.3.1 基因型对黄瓜离体雌核发育诱导单倍体的影响  39
    3.3.2 TDZ 浓度雌核发育启动率的影响  39-40
    3.3.3 AgNO_3 浓度对雌核发育启动率的影响  40-41
第四章黄瓜DH 群体SSR 标记图谱构建  41-51
  4.1 试验材料  41-42
    4.1.1 作图亲本的选择与 DH 群体的构建  41
    4.1.2 主要试剂和仪器设备  41-42
  4.2 试验方法  42-44
    4.2.1 DNA 的提取  42
    4.2.2 引物的来源及筛选  42
    4.2.3 PCR 反应体系与 SSR 反应程序  42-43
    4.2.4 PCR 产物的检测  43
    4.2.5 数据记录与处理  43
    4.2.6 SSR 图谱的构建  43-44
  4.3 结果与分析  44-48
    4.3.1 多态性SSR 引物筛选  44
    4.3.2 SSR 标记在DH 群体中的遗传分析  44-47
    4.3.3 SSR 遗传图谱的构建  47
    4.3.4 偏分离SSR 标记在图谱上的分布  47-48
  4.4 讨论与结论  48-51
    4.4.1 SSR 标记的遗传多样性  48
    4.4.2 作图亲本的多态性  48-49
    4.4.3 遗传图谱的构建  49
    4.4.4 偏分离现象  49-51
第五章结论  51-52
参考文献  52-58
附录  58-59
致谢  59-60
导师简介  60-61
个人简介  61-62

黄瓜离体雌核发育诱导单倍体及其DH群体SSR标记图谱构建

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