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关于更年颗粒药学部分的探究

作 者: 易延逵
导 师: 陈志良
学 校: 第一军医大学
专 业: 药理学
关键词: 更年颗粒 SFE-CO2工艺 水蒸气蒸馏工艺 β-CD包合 “全指纹图谱系”
分类号: R286
类 型: 博士论文
年 份: 2007年
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内容摘要


目的:在更年颗粒工艺及质量控制研究等前期工作基础上,对更年颗粒工艺进一步进行研究和改进,对更年颗粒质量控制进一步进行研究,对有关新的质量控制技术进行探索性研究。采用SFE-CO2技术、高分子材料包合技术等先进的新工艺、新技术,对中药复方有效成分进行提取、保护研究;对工艺与成分提取的关系进行研究,对药材采用不同的工艺提取进行比较;对高分子材料包合中药复方提取物工艺进行深入研究;对包合物采用多种验证方法进行鉴定,并对其稳定性进行考查,预测其有效期。采用现代指纹图谱质量控制技术的基础上,针对中药质量控制的特点,提出了建立“全指纹图谱系”以控制中药的质量,对更年颗粒进行了“全指纹图谱系”制定的初步探讨。在中医药“君、臣、佐、使”配伍理论的指导下,利用现代植物化学、计算机技术的研究成果,采用先进的分析手段,对中药制剂的工艺质量进行全面地提高,为研制现代的中药制剂奠定基础。方法:(1)应用HPLC法测定更年颗粒中当归、白术、香附、砂仁等四味药材(简称“A”)提取物中的阿魏酸、α-香附酮含量,并进行了方法学考查。阿魏酸含量测定方法为:Agilent 1100液相色谱仪,C18柱(Kromasil 250×4.6mm,100-5),乙腈-0.085%磷酸溶液(17:83)为流动相,流速1.00ml/min,柱温室温25℃,检测波长为316nm,理论塔板数按阿魏酸峰计算应不低于5000,进样量5μl;α-香附酮含量测定方法为:Agilent 1100液相色谱仪,C18柱(Kromasil250×4.6mm,100-5);甲醇-水(80:20)为流动相,流速1.00ml/min,柱温室温25℃,检测波长为254nm;理论塔板数按α-香附酮峰计算应不低于1500,进样量10μl。(2)采用单因素试验,以阿魏酸、α-香附酮提取量为考查指标,考查了药材粉碎粒度,夹带剂种类、用量,萃取压力,解析压力,CO2流量,萃取温度,萃取时间等对SFE-CO2提取的影响;并进一步采用均匀设计法对A超临界提取的主要影响因素萃取压力、萃取温度、萃取时间、解析压力等工艺条件进行优选。以提取物提取量为考查指标,选择了A采用水蒸气蒸馏提取是用分提还是用合提;影响水蒸气蒸馏法的因素主要有:加水量、浸泡时间、蒸馏时间,因而以挥发油提取量、α-香附酮提取量为考查指标,采用正交试验对提取时的加水量、浸泡时间及蒸馏时间进行了优选。以阿魏酸提取量、α-香附酮提取量为考查指标,对A采用SFE-CO2工艺与蒸馏提取工艺进行了比较研究,考查了两种工艺对提取量的影响。以阿魏酸提取量为考查指标,探讨了当归提取成分种类与SFE-CO2提取工艺条件的关系。以阿魏酸提取量为考查指标,比较了当归采用SFE-CO2提取工艺、水蒸气蒸馏工艺、水蒸气蒸馏后水提工艺、乙醇渗漉工艺、乙醇回流提取工艺等不同工艺对阿魏酸提取量的影响。(3)以包合物利用率为考查指标,采用单因素试验法,分别考查了包合物种类、包合方法、包合物用量、包合时的温度、包合时间等对A提取物包合物利用率影响。以包合物利用率为考查指标,采用正交试验优选了包合的β-CD用量,包合温度、搅拌时间等三种工艺条件。对A提取物的β-CD包合物进行了定性试验:对β-CD包合物进行了薄层鉴别,采用硅胶G薄层板,用石油醚-醋酸乙酯(17:3)为展开剂,置紫外灯(365nm)下检视;采用紫外可见分光光度法,以吸收曲线与吸收峰的位置和高度来判断包合物形成情况,采用日本岛津公司UV-2401型可见紫外分光光度计,在200~600nm对β-CD包合物进行扫描。对A提取物的β-CD包合物进行了稳定性试验:对β-CD包合物进行了平衡吸湿率与临界相对湿度的测定;采用化学动力学法——温度系数法(Q10法)预测了β-CD包合物的有效期。(4)采用HPLC法,对更年颗粒的“全指纹图谱系”制定进行探讨,探讨更年颗粒中苷类成分指纹图谱的制定。以芍药苷为参照物,Agilent 1100高效液相色谱仪,C18色谱柱(Kromasil 250×4.6mm,100-5),Agilent数据处理软件,乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,流速1.00ml/min,柱温室温,检测波长225nm,进样10μl,记录时间50分钟,以芍药苷的色谱峰(S峰)的保留时间和峰面积为1计算各峰相对保留时间和相对峰面积比值;并进行了方法学考查;采用国家药典委员会的“中药色谱指纹图谱相似性评价系统”进行相似度评价。分别制备了更年颗粒的药材供试品溶液、缺味更年颗粒的供试品溶液,按更年颗粒中苷类成分指纹图谱的制定方法绘制各色谱图,与更年颗粒中苷类成分指纹图谱进行对比分析。结果:(1)阿魏酸方法学考查结果:阿魏酸在0.050~0.800μg范围内具有良好的线性关系,回归方程:Y=4130.8x+4.9042,R2=0.9999;精密度试验结果表明精密度良好,RSD0.62%;稳定性试验结果表明供试品溶液在12小时内峰面积值基本稳定,RSD1.25%;重现性试验结果表明其重现性良好,RSD3.18%;加样回收率试验结果表明其加样回收率符合规定,平均回收率为96.50%。α-香附酮方法学考查结果;α-香附酮在9.92~79.36μg范围内具有良好的线性关系,标准曲线回归方程的为:Y=273.34X+26.116,R2=0.9999;精密度试验结果表明精密度良好,RSD1.42%;稳定性试验结果表明供试品溶液在12小时内峰面积值基本稳定,RSD1.09%;重现性试验结果表明其重现性良好,RSD0.76%;加样回收率试验结果表明其加样回收率符合规定,平均回收率为98.47%。(2)A SFE-C02提取的单因素试验法结果:药材粉碎粒度对阿魏酸、α-香附酮等成分提取量影响不大,为尽量提取出有效成分,采用粗颗粒为宜;夹带剂种类对成分提取量影响差异显著,以加95%乙醇和甲醇成分提取量最高,考虑提取操作的安全性、经济性,采用95%乙醇为宜;夹带剂用量达药材量的20%时,成分提取量保持稳定,考虑提取的经济性,夹带剂用量以20%为宜;萃取压力越高,解析压力越高,CO2流量越大时,成分提取量增加,但当萃取压力达25~30MPa,解析压力达8~10MPa,CO2流量达10~12L/h,成分提取量基本达到平衡,考虑提取的经济性和设备安全性,采用萃取压力为25~30MPa,解析压力以8~10MPa,CO2流量以10~12L/h为宜;萃取温度达40~45℃时,成分提取量保持稳定,考虑提取的经济性、安全性,采用40~45℃为宜;萃取时间达60min时,成分基本提取完全,考虑提取的经济性,采用60min为宜。均匀设计试验结果表明,萃取压力、萃取温度、萃取时间越接近最大值,萃取率会越高,但实际操作中,萃取压力、萃取温度不能过高,萃取压力应在25~30Mpa之间,萃取温度应在40~45℃之间。因而A SFE-CO2最佳萃取条件为:萃取压力25~30Mpa,萃取温度40~45℃,CO2流量10~12L/h,萃取时间1小时左右。验证试验结果表明工艺基本合理,重现性良好。A采用水蒸气蒸馏提取进行分提与合提提取物提取量无显著性差异(P>0.05),考虑提取的经济性,选用合提为宜。正交试验优选A采用水蒸气蒸馏提取的最佳工艺条件为加5倍量水,不浸泡,蒸馏提取5小时。阿魏酸等极性较大的成分,蒸馏提取工艺难以提取出,而SFE-C02工艺可以很好的提取;α-香附酮极性较小的成分可以通过两种工艺提取,但两种工艺有极显著性差异(P<0.01),SFE-CO2工艺明显高于水蒸气蒸馏提取工艺。当归中阿魏酸提取量,随夹带剂乙醇浓度的升高而增加,以甲醇为夹带剂提取量最大,但采用95%乙醇为夹带剂时,已经接近甲醇为夹带剂时的提取量,同时考虑工业生产的安全性和经济性,工业生产以95%乙醇为夹带剂为宜。当归不同提取工艺比较结果:当归中阿魏酸的提取量,以SFE-CO2提取工艺的提取量最高,其次依次是乙醇渗漉工艺、乙醇回流提取工艺、水提工艺,水蒸气蒸馏工艺几乎提取不出阿魏酸。(3)A提取物包合的单因素试验法结果:包合物种类的包合物利用率以β-CD最高,其次依次为乙基纤维素、硅胶、尿素,β-CD包合物利用率明显高于其它的包合材料;包合方法的包合物利用率以饱和水溶液法最高,其次依次为研磨法、超声波法;包合物用量的包合物利用率随β-CD用量增加而增大,但β-CD用量达到提取物量的8倍量时,包合物利用率基本达到平衡;包合温度在25℃以上,包合物利用率随包合温度升高而减小,因而以室温为宜;包合时间的包合物利用率随包合时间增加而增大,但包合时间达到3小时时,包合物利用率基本达到平衡;同时发现,β-CD用量,包合温度、搅拌时间是三种最重要的影响因素。正交试验结果β-CD包合A提取物的最佳工艺条件为加8倍量β-CD,室温下搅拌3小时。A提取物的β-CD包合物定性试验结果:薄层试验中提取物石油醚溶液薄层斑点清晰,纯β-CD无斑点,β-CD包合物采用石油醚洗脱只能洗脱表面残留的提取物,首次β-CD包合物石油醚洗脱液只有较模糊的斑点,而再次洗脱液几乎没有斑点,只有热回流供试液才有明显的斑点,从而说明了包合物确已形成;紫外可见扫描结果:提取物样品溶液在260nm左右有最大吸收,纯β-CD溶液有末段吸收,但在260nm左右无最大吸收,首次β-CD包合物石油醚洗脱液只有在260nm左右较小的峰,而再次洗脱液几乎没有吸收,只有热回流供试液在260nm左右才有明显的吸收,从而进一步说明了包合物确已形成。A提取物的β-CD包合物稳定性试验结果:β-CD包合物临界相对湿度约为68%,因而β-CD包合物宜贮存于相对湿度低于65%的环境中,这与一般的中药制剂相似;β-CD包合物有效期约为1.26年,这接近一般中药制剂的有效期。(4)制定了更年颗粒中苷类成分的指纹图谱,标注了更年颗粒中苷类成分9个共有指纹峰。方法学考查结果:精密度试验结果,各共有指纹峰的相对保留时间和相对峰面积基本一致,RSD<2%;稳定性试验结果,在0、2、4、6、8h各共有指纹峰的相对保留时间、相对峰面积基本一致,RSD<2%,样品液在8h内稳定;重复性试验中,各共有指纹峰的相对保留时间、相对峰面积基本一致,RSD<2%。相似度计算(全谱)结果10批样品的相似度均在0.80以上。与更年颗粒中苷类成分指纹图谱进行对比分析结果基本确定了各指纹蜂的来源。结论:采用SFE-CO2工艺能明显提高成分的提取量和能使提取成分的种类增加,能明显提高挥发性成分的提取,优于水蒸气蒸馏提取工艺,也优于其它的提取方法;药材中成分提取与SFE-CO2工艺条件密切相关。挥发性成分采用现代的分子包合工艺稳定可行,其稳定性明显增加,有效期明显延长,达到药剂的要求。通过对更年颗粒中苷类成分指纹图谱的制定,初步探讨了中药“全指纹图谱系”的制定,为提高中药质量控制技术进行了有意义的探索。从而为现代中药的研制采用先进的现代技术手段提供了依据,为中药制剂现代化提供了方法。

全文目录


摘要  3-9
ABSTRACT  9-21
第一部分 关于A挥发性成分提取工艺的探讨  21-51
  1.1 阿魏酸、α-香附酮含量测定方法学考查  21-31
  1.2 A的SFE-CO_2工艺研究  31-41
    1.2.1 设备与器材  31-32
    1.2.2 单因素对提取的影响研究  32-38
    1.2.3 均匀设计优选A SFE-CO_2提取工艺条件  38-41
  1.3 A蒸馏提取工艺的研究  41-46
    1.3.1 材料与仪器  41
    1.3.2 A分提与合提的选择  41-42
    1.3.3 A水蒸气蒸馏提取工艺的优选  42-46
  1.4 A SFE-CO_2工艺与水蒸气蒸馏提取工艺的比较研究  46-48
  1.5 当归有关提取工艺的比较研究  48-51
    1.5.1 材料  48
    1.5.2 当归提取成分种类与SFE-CO_2提取工艺条件的关系研究  48-49
    1.5.3 当归不同提取工艺的比较研究  49-51
第二部分 A挥发性成分包合工艺的研究  51-67
  2.1 器材  51
  2.2 包合条件对提取物包合物利用率影响的研究  51-58
  2.3 正交试验优选β-CD包合工艺条件  58-61
  2.4 β-CD包合物的定性试验  61-64
    2.4.1 β-CD包合物的薄层鉴别  61-62
    2.4.2 β-CD包合物的紫外鉴别  62-64
  2.5 β-CD包合物稳定性考查  64-67
    2.5.1 β-CD包合物吸湿性考查  64-66
    2.5.2 化学动力学法—温度系数法(Q10法)预测β-CD包合物的有效期  66-67
第三部分 更年颗粒"全指纹图谱系"的初探  67-84
  3.1 仪器与材料  67
  3.2 方法与结果  67-78
    3.2.1 色谱条件与系统适用性试验  67-68
    3.2.2 供试品溶液的制备  68-69
    3.2.3 参照物的选择和制备  69
    3.2.4 测定法  69
    3.2.5 方法学考查  69-74
    3.2.6 更年颗粒中苷类成分指纹图谱的建立  74-78
  3.3 "全指纹图谱系"指纹图中指纹峰与药味的相关性考查  78-84
    3.3.1 供试品溶液的制备  78-79
    3.3.2 图谱的测定  79-84
第四部分 讨论  84-110
  4.1 SFE-CO_2萃取工艺的关键技术研究  84-90
    4.1.1 SFE-CO_2萃取工艺研究进展  84-87
    4.1.2 A SFE-CO_2提取工艺的研究  87-90
  4.2 生物包合的研究  90-95
    4.2.1 生物包合的国内外研究现状  90-92
    4.2.2 环糊精包合中药复方中挥发性成分的研究  92-95
  4.3 中药"全指纹图谱系"的研究  95-110
    4.3.1 中药指纹图谱的研究评析  95-104
    4.3.2 中药"全指纹图谱系"的研究分析  104-108
    4.3.3 更年颗粒"全指纹图谱系"的研究  108-110
参考文献  110-114
攻读学位期间成果  114-115
致谢  115-116

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