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评估运动员免疫机能的指标与方法研究

作　者: 王恬
导　师: 陈佩杰
学　校: 上海体育学院
专　业: 运动人体科学
关键词: 模拟低氧训练冬训期训练 Th1/Th2细胞树突状细胞自然杀伤T细胞细胞因子免疫平衡
分类号: R87
类　型: 博士论文
年　份: 2008年
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内容摘要

研究目的:通过建立一个由T淋巴细胞亚群、自然杀伤细胞(NK)、自然杀伤T细胞(NKT)、树突状细胞(DC)、Th1/Th2细胞亚群相关细胞因子等多个免疫指标构成的检测网络系统,采用流式细胞仪检测技术、酶联免疫斑点技术、实时荧光定量PCR技术等目前国际流行的免疫检测方法,观察女子赛艇运动员高住高练低训(HiHiLo)和低住高练(LoHi)过程中及女子游泳运动员冬训期训练过程中免疫机能的动态变化状况,旨在了解运动员机体免疫功能的变化特点和规律,寻找有意义的免疫指标及有应用价值的检测方法,为更准确掌握运动员对训练方式和运动负荷的适应状况、及时掌握运动员身体机能的变化状态、提高运动训练质量提供客观依据。研究方法:模拟低氧训练的研究:受试者为上海市赛艇队12名女子赛艇运动员,分成HiHiLo组和LoHi组,进行为期5周的模拟低氧训练。HiHiLo组为低氧训练+低氧睡眠+常氧专项训练。LoHi组为低氧训练+常氧专项训练。低氧训练和睡眠时低氧房空气的氧含量为15.4%,相当于2500m的海拔高度。在低氧训练前、低氧训练的第1周、第4周、第5周及恢复2周周末清晨抽取受试者肘静脉血。应用流式细胞仪检测技术、实时荧光定量PCR技术等检测方法,分别检测外周血T淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+)、NK细胞、NKT细胞的表达;γ-干扰素(IFN-γ)mRNA、白介素-4(IL-4)mRNA以及穿孔素(PFR)mRNA在外周血白细胞中的表达;外周血皮质醇(C)、睾酮(T)的浓度。冬训期运动训练的研究:受试者为浙江省游泳队8名女子游泳运动员。冬训期训练周期由二周中等强度大运动量训练、二周大强度中运动量训练及一周中等强度中运动量恢复训练所构成。以运动训练周期前的调整期作为基础值。于调整期、冬训期训练第2周、第3周、第4周、恢复1周周末运动结束36h后清晨抽取受试者肘静脉血。应用流式细胞仪检测技术、酶联免疫斑点技术、实时荧光定量PCR技术等检测方法,分别检测外周血DC、CD3+、CD4+、CD8+、NK细胞、NKT细胞的表达;典型的Th1型和Th2型细胞因子IFN-γ、IL-4蛋白水平和基因水平在外周血白细胞中的表达;白细胞及其分类的数量和百分比;外周血C、T的浓度。研究结果:模拟低氧训练的研究结果如下:1、低氧训练的第4周、第5周NKT细胞表达明显下降。2、5周的模拟低氧训练结束后淋巴细胞亚群中的各项免疫指标已基本恢复至低氧训练前水平或高于低氧训练前水平。3、低氧训练第5周IFN-γmRNA表达上调,IL-4mRNA、PFRmRNA则出现表达下调,Th1/Th2比值升高。4、HiHiLo组和LoHi组总体变化趋势相似,二组之间多数指标无显著性差异变化。冬训期运动训练的研究结果如下:1、运动可刺激DC生成明显增多,并随运动量与运动强度的增加而增加。2、运动量与运动强度增加后NKT细胞表达呈现明显下降。3、冬训期运动训练的第4周T淋巴细胞亚群表达明显下降,恢复1周时仍处于较低水平。4、不同检测方法检测的Th1/Th2比值在冬训期的变化不明显或出现升高。研究结论:1、5周的模拟低氧训练能使机体的免疫功能得到一定程度的提高,表明HiHiLo、LoHi是安全有效的低氧训练法。2、NKT细胞在运动训练过程中变化早、幅度大,可考虑作为首选的免疫指标监测运动员的免疫机能。3、DC可作为新的免疫指标运用于运动免疫的监测中。4、运动员进行不同负荷的运动所测得的免疫指标的变动趋势表明,持续时期较长的大负荷运动,有可能引起免疫功能出现抑制性变化。5、不同运动训练过程中各免疫指标的变化并不呈现完全同步的趋势。6、模拟低氧训练及冬训期运动训练中机体Th1/Th2细胞平衡均维持正常或向着Th1方向漂移,并没有明显的运动免疫性抑制失衡现象出现。7、流式细胞术胞内细胞因子检测、酶联免疫斑点技术、实时荧光定量PCR技术均为理想的研究方法,可在运动免疫的研究中推广应用。

全文目录

摘要  3-5
ABSTRACT  5-7
缩略语中英文对照  7-11
前言  11-13
第一部分模拟低氧训练过程中评估运动免疫机能的指标研究  13-32
  1 材料与方法  13-16
    1.1 研究对象  13
    1.2 运动方式  13-14
    1.3 检测指标  14
    1.4 检测方法  14-15
      1.4.1 淋巴细胞亚群的检测  14
      1.4.2 细胞因子mRNA 的检测  14-15
      1.4.3 睾酮、皮质醇的检测  15
    1.5 测试指标、仪器与方法  15-16
    1.6 统计分析  16
  2 实验结果  16-25
    2.1 模拟低氧训练中女子赛艇运动员T 淋巴细胞亚群的变化  16-18
    2.2 模拟低氧训练中女子赛艇运动员NK、NKT 的变化  18-20
    2.3 模拟低氧训练中女子赛艇运动员 IFN-γ、IL-4、PFR 基因表达的变化  20-23
      2.3.1 IFN-γ、IL-4、PFR 和GAPDH 基因表达时的标准曲线  20-21
      2.3.2 HiHiLo 和LoHi 训练过程中IFN-γmRNA、IL-4mRNA、PFRmRNA 的变化  21-23
    2.4 模拟低氧训练中女子赛艇运动员皮质醇、睾酮的变化  23-25
  3 分析与讨论  25-30
    3.1 研究的目的意义  25-26
    3.2 模拟低氧训练对淋巴细胞亚群的影响  26-28
      3.2.1 低氧训练对CD3~+、CD4~+、CD8~+T 淋巴细胞亚群的影响  26-27
      3.2.2 低氧训练对NK 细胞的影响  27
      3.2.3 低氧训练对NKT 细胞的影响  27-28
     3.3 模拟低氧训练对 IFN-γ、IL-4、PFR 基因表达的影响  28-29
      3.3.1 低氧训练对IFN-γmRNA 表达的影响  28
      3.3.2 低氧训练对IL-4mRNA 表达的影响  28-29
      3.3.3 低氧训练对 PFRmRNA 表达的影响  29
    3.4 模拟低氧训练对睾酮、皮质醇及其比值的影响  29-30
  4 结论  30-31
  研究贡献与后续研究思路  31-32
第二部分冬训期训练过程中评估运动免疫机能的指标与方法研究  32-61
  1 实验对象与方法  32-36
    1.1 实验对象  32
    1.2 实验方法  32-36
      1.2.1 训练方案  32-33
      1.2.2 取样  33
      1.2.3 检测方法  33-36
    1.3 统计分析  36
  2 实验结果  36-52
    2.1 冬训期训练过程中女子游泳运动员细胞因子的变化  36-46
      2.1.1 流式细胞术检测Th1、Th2、Tc1、Tc2 的变化  36-40
      2.1.2 酶联免疫斑点（ELISPOT）技术检测Th1、Th2 细胞数的变化  40-43
      2.1.3 实时荧光定量PCR 检测IFN-γmRNA、IL-4mRNA、PFRmRNA 的表达  43-46
    2.2 冬训期训练过程中女子游泳运动员树突状细胞的变化  46-47
    2.3 冬训期训练过程中女子游泳运动员淋巴细胞亚群的变化  47-49
    2.4 冬训期训练过程中女子游泳运动员白细胞及分类计数、百分比的变化  49-51
    2.5 冬训期训练过程中女子游泳运动员睾酮、皮质醇及比值的变化  51-52
  3 分析与讨论  52-60
    3.1 细胞因子检测方法的比较  52-54
    3.2 冬训期运动训练对 Th1/Th2 细胞因子的影响  54-56
      3.2.1 流式细胞术检测冬训期运动训练对Th1、Tc1、Th2、Tc2 的影响  55
      3.2.2 ELISPOT 技术检测冬训期运动训练对外周血IFN-γ分泌细胞和IL-4 分泌细胞的影响  55
      3.2.3 实时荧光定量 PCR 检测冬训期运动训练对 IFN-γ mRNA、IL-4 mRNA 的影响  55-56
      3.2.4 冬训期运动训练过程中Th1/Th2 细胞的免疫平衡  56
    3.3 冬训期运动训练对树突状细胞的影响  56-57
    3.4 冬训期运动训练对T 淋巴细胞亚群的影响  57-58
    3.5 冬训期运动训练对NK、NKT 细胞的影响  58
    3.6 冬训期运动训练对白细胞及其分类的影响  58-59
    3.7 冬训期运动训练对睾酮、皮质醇及其比值的影响  59-60
  4 结论  60-61
全文总结  61-62
创新点、研究不足及今后研究的方向  62-63
参考文献  63-72
研究综述运动免疫评定指标与方法的研究进展  72-89
  参考文献  81-89
致谢  89

评估运动员免疫机能的指标与方法研究

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