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双蛋白/双酶在线竞争性吸附/共固定化研究及应用

作　者: 徐芬
导　师: 杨梅
学　校: 辽宁师范大学
专　业: 分析化学
关键词: 辣根过氧化物酶竞争吸附在线固定化 XC-72
分类号: O647.31
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 23次
引　用: 1次
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内容摘要

固定化酶反应器与水溶性酶相比,固定于固相载体上的固相酶具有以下优点:可重复使用,因此可大大提高酶的使用效率,减少酶的用量,降低成本;稳定性好,多数酶经固定化后其操作稳定性和贮存稳定性均有所提高,并且使用时能在较宽的pH范围内或较高的温度下发挥作用,且对干扰物(激活剂、抑制剂)敏感性小,在4℃下通常可保存数月而其活性无明显降低;机械强度高,有利于将其应用于连续流动系统中。1、辣根过氧化物酶在三种孔材料上的在线固定化研究利用已建立的顺序注射紫外可见分析系统,以硅基介孔材料MCM-41、SBA-15和炭材料XC-72作为载体,研究和比较了辣根过氧化物酶(HRP)在三种无机孔材料上的在线吸附行为。结果表明:HRP在XC-72上的负载量和结合稳定性高于MCM-41和SBA-15,且以XC-72为载体制备的固定化HRP具有较高的活性和良好的操作稳定性。2、血清蛋白和血红蛋白在炭XC-72上的竞争性吸附研究本文利用分光光度定量分析方法,研究了血清蛋白(BSA)-血红蛋白(HB)在炭黑XC-72/PVC复合材料表面的吸附和竞争吸附行为。结果表明,复合材料对HB的亲和力大于BSA,但在竞争吸附中BSA的吸附量明显高于单组分吸附量,而HB的吸附量与单组分吸附量相当。实验结果为进一步研究双酶在炭黑表面的固定化提供了新的理论基础。3、葡萄糖氧化酶和辣根过氧化物酶的共固定化研究本文在前人研究经验的指导下,以炭黑材料(XC-72/PVC)为载体,用物理吸附方法在线制备共固定化葡萄糖氧化酶/辣根过氧化物酶(GOD/HRP)反应器,深入探讨双酶体系共固定化的机理。结果表明:共固定化酶柱反应器对葡萄糖的定量分析性能良好,在最佳实验条件下,对葡萄糖的检出限为0.67 mmol/l,分析频率为每小时12个样品。GOD/HRP酶柱的存储稳定性较好,可以在冰箱中冷冻一周其活性仍未降低,并且在较宽的温度范围内呈现良好的热稳定性。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-8
1 绪论  8-22
  1.1 固定化酶  8-13
    1.1.1 固定化载体  8-10
    1.1.2 固定化方法  10-12
    1.1.3 酶固定化效能的影响因素  12-13
  1.2 蛋白质吸附特性  13-15
    1.2.1 蛋白质吸附的机理  13-14
    1.2.2 蛋白质的吸附过程及影响因素  14
    1.2.3 蛋白质的竞争吸附  14-15
  1.3 顺序注射中的固相反应器  15-20
    1.3.1 固相氧化还原反应器  16-17
    1.3.2 固相分离反应器  17-18
    1.3.3 固相萃取反应器  18-19
    1.3.4 固相酶反应器  19-20
  1.4 本论文的选题思路和研究目标  20-22
2 辣根过氧化物酶在三种孔材料上的在线固定化  22-28
  2.1 引言  22-23
  2.2 实验部分  23-25
    2.2.1 实验原理  23
    2.2.2 仪器与试剂  23-24
    2.2.3 材料预处理  24
    2.2.4 实验方法  24-25
  2.3 结果与讨论  25-27
    2.3.1 三种材料的酶固载量比较  25-26
    2.3.2 三种材料的吸附前后游离酶活性比较  26
    2.3.3 固定化HRP 的活性和操作稳定性  26-27
  2.4 小结  27-28
3 血清蛋白和血红蛋白在炭XC-72 上的竞争性吸附研究  28-35
  3.1 引言  28-29
  3.2 实验部分  29-30
    3.2.1 仪器与试剂  29
    3.2.2 固定柱的制备  29
    3.2.3 一元蛋白的吸附平衡实验  29
    3.2.4 二元蛋白体系的竞争吸附实验  29-30
    3.2.5 蛋白固载量的测定  30
  3.3 结果与讨论  30-34
    3.3.1 吸收光谱的测定  30-31
    3.3.2 吸附条件的优化  31
    3.3.3 一元蛋白吸附等温线  31-32
    3.3.4 二元蛋白在炭黑XC-72 表面的竞争吸附  32-34
  3.4 小结  34-35
4 葡萄糖氧化酶和辣根过氧化物酶的共固定化研究  35-48
  4.1 引言  35-36
  4.2 实验部分  36-37
    4.2.1 仪器与试剂  36
    4.2.2 实验原理  36
    4.2.3 固定化蛋白酶含量  36
    4.2.4 酶活力测定  36-37
  4.3 结果与讨论  37-47
    4.3.1 酶的吸收光谱  37
    4.3.2 共固定化酶溶液pH 值的确立  37-38
    4.3.3 共固定对固载量的影响  38-40
    4.3.4 共固定对酶活性的影响  40-45
    4.3.5 共固定化酶的稳定性  45
    4.3.6 方法的分析性能和样品测定  45-47
  4.4 小结  47-48
结论  48-49
参考文献  49-54
攻读硕士学位期间发表学术论文情况  54-55
致谢  55

双蛋白/双酶在线竞争性吸附/共固定化研究及应用

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