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铜绿假单胞菌氨基糖苷类耐药16S rRNA甲基化酶编码基因分布研究

作　者: 唐小平
导　师: 周建英
学　校: 浙江大学
专　业: 内科学
关键词: 铜绿假单胞菌氨基糖苷类抗生素 16S rRNA甲基化酶脉冲场凝胶电泳(PFGE)
分类号: R450
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要

铜绿假单胞菌(Peaudomonas aeruginosa)是一类不发酵糖的革兰阴性杆菌,广泛分布于水、土壤、医院环境和人体的皮肤表面,已成为医院获得性感染的主要致病菌之一,主要引起医院获得性肺炎尤其是呼吸机相关性肺炎、菌血症、尿路感染、继发性脑膜炎等。随着广谱抗菌药物的广泛使用,多重耐药铜绿假单胞菌日趋增多,成为临床抗感染治疗的巨大挑战,也对院内感染的控制提出了新的要求。氨基糖苷类抗生素是临床上治疗革兰阴性菌所致严重感染的常用药,常与β-内酰胺类等抑制细菌细胞壁合成的抗菌药物联合应用。近年来我国铜绿假单胞菌分离率明显增加,耐药率也不断上升。且已出现对β-内酰胺类、碳青霉烯类、氨基糖苷类、氟喹诺酮类抗菌药物同时耐药的多重耐药菌株的流行。对铜绿假单胞菌中出现的氨基糖苷类耐药新机制-16S rRNA甲基化酶进行研究,有利于进一步了解铜绿假单胞菌耐药的流行趋势和分子机理,指导临床用药。本实验收集2006年6月至2007年8月,全国15个省市临床分离的铜绿假单胞菌656株,琼脂稀释法测定异帕米星,阿米卡星,妥布霉素,奈替米星,庆大霉素5种氨基糖苷类抗生素对铜绿假单胞菌及铜绿假单胞菌的最低抑菌浓度(MIC)。PCR筛选六种16S rRNA甲基化酶基因armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD和npmA。对armA阳性菌株进一步PCR检测其周围结构,克隆测序明确基因型;脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析菌株的同源性;接合试验、质粒抽提,以及Southern杂交确定armA及rmtB基因定位。结果显示:656株铜绿假单胞菌对异帕米星,阿米卡星,妥布霉素,奈替米星,庆大霉素耐药率分别为31.8%、30.1%、45.5%、46.8%、56.5%;对5种氨基糖苷类抗生素全部耐药菌株179株,其中12株armA基因阳性,45株rmtB基因阳性。未发现rmtA、rmtC、rmtD和npmA基因。armA基因阳性菌株其周围序列与携带armA基因的Tn1548的周围结构部分相同。armA基因阳性菌株PFGE分型以A、B、C 3型为主,rmtB基因阳性菌株PFGE分型分析提示为十个克隆。碱裂解法抽提得到armA克隆A,B质粒,armA基因克隆C及rmtB基因阳性菌株质粒反复抽提失败,多次接合试验未成功;Southern杂交显示armA基因克隆A,B,C分别位于菌株染色体SpeⅠ-酶切片段48.5kb大小的片段上,rmtB基因位于菌株染色体SpeⅠ-酶切片段约80kb-400kb的不同大小片段上。以上研究表明,16S rRNA甲基化酶基因armA及rmtB基因在我国铜绿假单中广泛存在,在单家医院中流行以克隆播散为主,其基因可能定位于染色体上。铜绿假单胞菌armA基因的流行可能来源于耐药基因的水平播散。

全文目录

一、缩略语  4-5
二、论文摘要  5-10
  中文摘要  5-7
  英文摘要  7-10
三、正文  10-35
  材料  11-14
  方法  14-23
  结果  23-29
  讨论  29-32
  参考文献  32-35
四、综述  35-52
  介导氨基糖苷类抗生素耐药新机制---16S rRNA甲基化酶研究进展  35-47
  参考文献  47-52
五、致谢  52

铜绿假单胞菌氨基糖苷类耐药16S rRNA甲基化酶编码基因分布研究

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