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建立IAC-HPLC检测红曲米中的桔霉素
作 者: 郭雪梅
导 师: 许杨
学 校: 南昌大学
专 业: 食品科学
关键词: 桔霉素 红曲米 免疫亲和柱 高效液相色谱
分类号: TS212.7
类 型: 硕士论文
年 份: 2007年
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内容摘要
桔霉素(Citrinin,CIT)是由青霉属、曲霉属和红曲霉的某些菌株产生的一种广泛污染玉米、大米、小麦等农作物的真菌毒素,在红曲米中的污染尤为普遍,对动物及人类具有肾毒性、致畸性、致癌性等。目前检测CIT的主要方法有薄层层析法、高效液相色谱法、酶联免疫吸附检测法等。本研究建立了免疫亲和柱联高效液相色谱法(Immunoaffinity column-High Performance Liquid Chromatography,IAC-HPLC)检测红曲米中的CIT;并用此方法检测了41份市售及实验室自制的红曲米样品中的CIT含量。主要研究内容和结果如下:1抗CIT单克隆抗体免疫亲和柱的制备将纯化好的抗CIT单克隆抗体与溴化氰(CNBr)活化的琼脂糖凝胶(Sepharose)4FF偶联。采用紫外扫描鉴定偶联反应,间接竞争ELISA方法及HPLC方法检测制备好的免疫亲和柱的柱容量。每根抗CIT单克隆抗体免疫亲和柱,用0.5mL活化胶,0.50mg抗CIT单克隆抗体,柱容量为0.35μg。2建立了分析红曲米中CIT IAC-HPLC该方法线性范围100μg/kg~600μg/kg,信噪比为3:1时,最低检测限为100μg/kg,超过日本的限量标准(200μg/kg);红曲米样品添加CIT标准品(100μg/kg~600μg/kg),用70%甲醇水溶液提取样品中CIT,经免疫亲和柱净化、0.01mol/L的PBS淋洗、纯甲醇洗脱,HPLC荧光法检测,平均回收率分别为74.2%~87.14%,相对标准偏差分别为2.85%~13.12%。3市售红曲米中CIT含量的测定采用本研究建立的IAC—HPLC方法对41份红曲米样品中的CIT含量进行了检测。IAC—HPLC分析的结果显示,其中有25份红曲米样品中桔霉素含量超过日本的标准(200μg/kg),超标率61.0%,红曲米中CIT含量为100μg/kg~986μg/kg。
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全文目录
摘要 3-4 缩略语 4-6 ABSTRACT 6-9 第一章 综述 9-23 1.1 桔霉素的研究进展 9-12 1.1.1 桔霉素的物理化学特性 9-10 1.1.2 桔霉素的产生及其自然分布 10 1.1.3 桔霉素的抑菌性 10-11 1.1.4 桔霉素的毒性 11 1.1.5 红曲霉产桔霉素问题及控制措施 11-12 1.2 桔霉素的检测方法 12-21 1.2.1 薄层层析法 12-13 1.2.2 酶联免疫吸附法 13-15 1.2.3 高效液相色谱法 15-21 1.3 主要研究内容、选题目的和意义 21-23 第二章 建立免疫亲和柱联高效液相色谱法检测红曲米中的桔霉素 23-53 2.1 仪器与试剂 23-27 2.1.1 实验材料 23 2.1.2 仪器与设备 23-24 2.1.3 试剂和溶液配制 24-27 2.2 实验方法与步骤 27-36 2.2.1 建立酶联免疫吸附法检测桔霉素 27-31 2.2.2 建立高效液相色谱方法检测桔霉素 31 2.2.3.抗桔霉素单克隆抗体免疫亲和柱制备 31-35 2.2.4 建立免疫亲和柱联高效液相色谱法检测红曲米中桔霉素含量 35 2.2.5 免疫亲和柱联高效液相色谱法检测市售样品中的桔霉素含量 35-36 2.3 结果 36-53 2.3.1 建立酶联免疫吸附法检测桔霉素 36-39 2.3.2 建立高效液相色谱法检测桔霉素 39-42 2.3.3 抗桔霉素单克隆抗体免疫亲和柱的制备 42-48 2.3.4 建立免疫亲和柱连高效液相色谱法检测红曲米中桔霉素含量 48-51 2.3.5 红曲米中的桔霉素含量测定 51-53 第三章 讨论 53-61 3.1 色谱条件 53-55 3.1.1 色谱柱 53 3.1.2 检测波长 53-54 3.1.4 流动相 54-55 3.2 免疫亲和柱制备的研究 55-58 3.2.1 抗体 55-56 3.2.2 载体的选择 56-57 3.2.3 偶联 57-58 3.3 免疫亲和柱使用条件 58-60 3.3.1 评价方法的选择 58 3.3.2 样品提取方法 58-59 3.3.3 上样条件 59 3.3.4 洗涤 59 3.3.5 洗脱 59-60 本研究的创新之处 60-61 第四章 小结 61-63 4.1 研制了抗桔霉素单克隆抗体免疫亲和柱 61 4.2 建立了分析红曲米中桔霉素含量的免疫亲和柱联高效液相色谱法 61-62 4.3 红曲米样品中桔霉素含量的测定 62-63 致谢 63-64 参考文献 64-69 个人简介 69
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中图分类: > 工业技术 > 轻工业、手工业 > 食品工业 > 粮食加工工业 > 碾米工业 > 产品标准与检验
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