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小鹅瘟病毒VP3基因疫苗诱导BALB/c小鼠细胞免疫和体液免疫的研究

作　者: 卢菲
导　师: 汪铭书；程安春
学　校: 四川农业大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 小鹅瘟病毒VP3基因疫苗 细胞免疫 体液免疫
分类号: S852.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要


本研究将小鹅瘟病毒VP3基因疫苗以三个剂量（1μg、3μg和6μg）基因枪轰击、三个剂量（50μg、100μg和200μg）肌肉注射分别免疫BALB/c小鼠，同时设肌肉注射小鹅瘟弱毒疫苗、空载体pcDNA3.1（+）和生理盐水为对照。在免疫后的3d、7d、14d、21d、28d、35d、49d、63d、77d、105d采抗凝血和凝血两份，133d、161d、189d、217d采凝血一份。采用淋巴细胞增殖试验（MTT法）、流式细胞术（FACS）及间接ELISA分别对小鼠的细胞免疫和体液免疫进行检测。结果如下：1．小鼠外周血T淋巴细胞的转化功能：①除肌注200μg组外五个剂量的pcDNA-GPV-VP3基因疫苗免疫小鼠后外周血T淋巴细胞都对ConA有明显的反应性，从第14d开始增强，第28d时达到最高值，以后开始下降，且与对照组比较都差异极显著（P＜0.01）或显著（P＜0.05）。空载体对照组在第7-63d时还显著（P＜0.05）高于生理盐水对照组。②基因枪轰击免疫小鼠后外周血T淋巴细胞对ConA的反应，6μg组＞3μg组＞1μg组，表现出一定的剂量依赖性。③肌注免疫小鼠后外周血T淋巴细胞对ConA的反应，100μg组在免疫后21-35d极显著（P＜0.01）高于50μg和200μg组，而200μg组的反应与生理盐水对照组相似。④基因枪轰击组与肌注组比较，二者间无显著性差异。⑤基因疫苗组与弱毒疫苗组比较，基因枪轰击3、6μg组和肌注50μg、100μg组分别在第28d、7-105d、28d、21-35d都极显著（P＜0.01）或显著（P＜0.05）高于弱毒疫苗组。2．CD4+、CD8+T淋巴细胞数：①六个剂量的pcDNA-GPV-VP3基因疫苗免疫小鼠后，小鼠外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞值都在第28d时达到最大值，且在不同的时间段都极显著（P＜0.01）或显著（P＜0.05）高于空载体和生理盐水对照组。②基因枪轰击免疫小鼠后，小鼠外周血CD4+T淋巴细胞值6μg组较高，CD8+T淋巴细胞值基因枪轰击组间差异不显著。③肌注免疫小鼠后，小鼠外周血CD4+、CD5+T淋巴细胞值50μg组都高于100、200μg组。④基因枪轰击组与肌注组比较，小鼠外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞值基因枪轰击6μg组和肌注50μg组都高于其它各组，其它组之间差异不显著。⑤基因疫苗组与弱毒疫苗组比较，小鼠外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞值基因枪轰击3、6μg组和肌注50μg组都高于弱毒疫苗。3．小鼠血清中特异性GPV血清抗体IgG动态变化：①六个剂量的pcDNA-GPV-VP3基因疫苗免疫小鼠后，小鼠血清中特异性GPV血清抗体OD值从第14d开始升高，第21d达到最大值，以后开始下降，且在不同的时间段都显著（P＜0.05）或极显著（P＜0.01）高于空载体和生理盐水对照组。②基因枪轰击免疫小鼠后，小鼠血清中特异性GPV血清抗体OD值6μg组＞3μg组＞1μg组，表现出一定的剂量依赖性。③肌注免疫小鼠后，小鼠血清中特异性GPV血清抗体OD值200μg组较高。④基因枪轰击组与肌注组比较，小鼠血清中特异性GPV血清抗体OD值除200μg组较高外，其它各组筹异不显著。⑤基因疫苗组与弱毒疫苗组比较，小鼠血清中特异性GPV血清抗体OD值基因枪轰击6μg组和肌注50、200μg组在第21-35d、21d都极显著（P＜0.01）或显著（P＜0.05）高于弱毒疫苗组。

全文目录


摘要  4-5
ABSTRACT  5-9
前言  9-13
1 材料与方法  13-17
  1.1 实验材料  13-14
    1.1.1 毒株、质粒及疫苗  13
    1.1.2 实验动物  13
    1.1.3 主要试剂  13-14
    1.1.4 主要仪器及应用软件  14
    1.1.5 其它实验材料  14
  1.2 实验方法  14-17
    1.2.1 实验设计  14-15
    1.2.2 基因枪"子弹"的准备  15
    1.2.3 血样的采集  15
    1.2.4 淋巴细胞转化实验  15-16
    1.2.5 T淋巴细胞亚群数量变化的检测  16
    1.2.6 血清IgG的检测  16-17
2 实验结果  17-32
  2.1 疫苗免疫小鼠后的实验结果  17-32
    2.1.1 不同剂量基因疫苗基因枪轰击小鼠后的免疫效果比较  22-24
    2.1.2 不同剂量基因疫苗肌肉注射小鼠后免疫效果的比较  24-26
    2.1.3 基因枪轰击和肌肉注射基因疫苗免疫小鼠后的效果比较  26-28
    2.1.4 基因疫苗与弱毒疫苗免疫小鼠后的效果比较  28-32
3 讨论  32-39
  3.1 机体免疫应答与病毒感染的关系  32
  3.2 小鼠免疫pcDNA-GPV-VP3基因疫苗后外周血T淋巴细胞转化效果  32-33
  3.3 小鼠免疫pcDNA-GPV-VP3基因疫苗后CD4~+、CD8~+T淋巴细胞动态变化  33
  3.4 小鼠免疫pcDNA-GPV-VP3基因疫苗后血清抗体IgG的动态变化  33-34
  3.5 免疫剂量对pcDNA-GPV-VP3免疫效果的影响  34-35
    3.5.1 不同剂量pcDNA-GPV-VP3基因枪轰击小鼠后免疫效果的比较  34
    3.5.2 不同剂量pcDNA-GPV-VP3肌肉注射小鼠后免疫效果的比较  34-35
  3.6 免疫途径对pcDNA-GPV-VP3免疫效果的影响  35-36
  3.7 小鼠免疫pcDNA-GPV-VP3基因疫苗和GPV弱毒疫苗后免疫效果的比较  36
  3.8 基因疫苗作用机理  36-37
  3.9 影响基因疫苗免疫效果的因素  37-38
  3.10 小鹅瘟基因疫苗研究意义及展望  38-39
4 结论  39-40
参考文献  40-44
致谢  44-45
附录:主要试剂配方  45-46
攻读学位期间发表的学术论文目录  46

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学（兽医学） > 兽医基础科学 > 血清学
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