学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

红树林土壤Streptomyces violaceoruber clade的选择性分离

作 者: 谢新强
导 师: 洪葵
学 校: 华南热带农业大学
专 业: 生物化学与分子生物学
关键词: Streptomyces violaceoruber clade 红树林土壤 生物活性 选择性分离
分类号: S714
类 型: 硕士论文
年 份: 2007年
下 载: 125次
引 用: 0次
阅 读: 论文下载
 

内容摘要


用五点采样法从福建九龙江口、广东湛江特呈岛及深圳福田、广西北海以及海南的三亚、儋州、清澜港、东寨港等8个地点的红树林采集了8份红树林土壤样品,利用链霉菌的系统发育特异引物对这8个地点的土壤样品提取的土壤总DNA进行了PCR扩增。对结果阳性的8个土样及它们的混合样,通过湿热、DDC(分散梯度离心)、风干等预处理方法将其在DH、RH、YE、Gause培养基上进行链霉菌及Streptomyces violaceoruber clade的分离。共分离到216株放线菌,对纯培养物进行发酵,发酵液作抗B16肿瘤细胞活性及抗MRSA活性测定,得到抗B16肿瘤细胞活性菌株46株,占总菌株数的21.30%,福建红树林分离到的微生物菌株数不仅多,而且活性菌株比率也较高。得到抗MRSA活性菌株25株,占总菌株数的9.72%,广东深圳红树林分离的MRSA菌活性菌株最多共6株,而且活性菌株比率也最高为27.27%。根据YE培养基上的培养特征对分离到的放线菌初步归类分群,结合测活结果选取28株菌作为代表菌株进行16S rDNA序列分析和细胞壁氨基酸糖份分析(薄板层析TLC),将分离到的放线菌鉴定到属,并构建系统发育树。28株放线菌分布在3个属,分别是:链霉菌属、野野村菌属、马杜拉放线菌属。分析不同预处理方法及分离培养基对分离结果的影响发现:DDC技术处理土样,分离到的菌株主要来自A部分;水浴加热预处理红树林样品时,条件为55℃,20min处理风干红树林土样分离效果好;RH培养基分离的菌株数最多,长出的放线菌多样并少有黄白色链霉菌长出;DH培养基适合于Streptomyces violaceoruber clade的选择性分离。Streptomyces violaceoruber clade宜在酸性环境下分离得到,在pH偏碱的环境中而难于分离到。用核糖核苷类合成酶基因、氨基糖苷类合成酶基因、聚酮合酶基因中的保守序列的特异引物分别对各个代表菌株进行PCR扩增,PCR扩增结果与测活结果比较显示:对某些酶扩增结果阳性的菌株,在抗肿瘤细胞或者抗MRSA未检测到活性。

全文目录


摘要  3-4
Abstract  4-8
1 前言  8-26
  1.1 目的  9-10
  1.2 红树林环境  10-11
  1.3 生物勘探  11-12
  1.4 链霉菌及其Streptomyces violaoeoruber clade  12-15
    1.4.1 链霉菌及其次级代谢途径研究  12-13
    1.4.2 Streptomyces violaceoruber clade  13-15
  1.5 链霉菌的选择性分离  15-19
    1.5.1 从环境样品中抽提繁殖体  16-17
    1.5.2 环境样品的预处理  17-18
    1.5.3 选择性培养基和非选择性培养基  18-19
  1.6 链霉菌的分类学  19-25
    1.6.1 化学分类  20-23
    1.6.2 基因型分类  23-25
  1.7 展望  25-26
2 材料与方法(Materials and Methods)  26-38
  2.1 Streptomyces violaceoruber clade分离  26-32
    2.1.1 培养基  26-27
    2.1.2 样品  27-28
    2.1.3 链霉菌的生物勘探  28-30
    2.1.4 Streptomyces violaceoruber clade的选择性分离  30-32
  2.2 活性检测  32-33
    2.2.1 抗肿瘤活性检测  32
    2.2.2 抗MRSA活性检测  32-33
    2.2.3 活性强度标准  33
  2.3 代表菌株的16S rDNA序列分析  33-35
    2.3.1 放线菌基因组DNA的提取  33
    2.3.2 琼脂糖凝胶电泳检测DNA的纯度及浓度  33-34
    2.3.3 16S rDNA的PCR扩增  34
    2.3.4 16S rDNA测序  34
    2.3.5 序列的校对、整理及分析  34-35
  2.4 放线菌细胞壁化学分析(薄板层析TLC)  35-36
    2.4.1 代表菌株的细胞壁氨基酸分析  35-36
    2.4.2 代表菌株的细胞壁糖份分析  36
  2.5 代表菌株的生物活性相关酶基因扩增  36-38
3 结果与分析(Results and Analysis)  38-57
  3.1 红树林土壤中的Streptomyces violaceoruber clade分离  38-45
    3.1.1 红树林土壤理化性质及养分含量  38-39
    3.1.2 链霉菌的生物勘探  39-40
    3.1.3 链霉菌的分离结果  40-42
    3.1.4 链霉菌的形态分群  42-45
  3.2 活性检测  45-47
    3.2.1 抗肿瘤细胞活性  45-46
    3.2.2 抗MRSA活性检测  46-47
  3.3 代表菌株的选择及初步分类鉴定  47-55
    3.3.1 代表菌株的选择  47
    3.3.2 代表菌株的16S rDNA序列分析  47-52
    3.3.3 代表菌株的细胞壁化学分析  52-55
  3.4 代表菌株的多种酶基因扩增  55-57
4 讨论  57-62
  4.1 不同地区红树林样品对分离结果的影响  57-58
  4.2 土样预处理方法对分离结果的影响  58
  4.3 培养基对分离结果的影响  58-59
  4.4 不同地区红树林分离到放线菌活性比较  59-60
  4.5 Streptomyces violaceoruber clade分离情况  60
  4.6 细胞壁分析结果与16S rDNA系统发育分析结果比较  60-61
  4.7 多种酶基因特异片段扩增结果与微生物活性测定结果比较  61-62
5 结论  62-63
参考文献  63-81
致谢  81

相似论文

  1. 南海多室草苔虫和脆灯芯柳珊瑚化学成分的研究,R284
  2. 两株南海海洋真菌次级代谢产物研究,R284
  3. 侧柏叶化学成分提取及活性功能研究,R284
  4. 基于目标成分“敲出/敲入”质量控制模式的中药姜黄抗氧化药效物质辨识,R285
  5. 预氧化强化生物活性炭滤池除氮效能及机理研究,X703
  6. 新型邻菲罗啉并咪唑衍生物的设计合成及生物活性研究,TQ460.1
  7. Eu3+和纳米Eu2O3对人肝细胞和肝癌细胞生长的影响,R735.7
  8. 医用镁合金表面激光熔覆Zr60Ti6Cu19Fe5Al10非晶涂层,TG174.44
  9. TC4合金表面脉冲激光沉积羟基磷灰石的组织和性能研究,TG146.23
  10. 水处理中生物活性炭吸附性能及其数学模型研究,X703
  11. 牛初乳中富脯氨酸多肽的特性和功能研究,TS252.1
  12. 二氧化钛中空球的制备及生物活性研究,TB43
  13. 棘托竹荪菌托抑菌物质及多糖研究,S646.8
  14. 江西酸性土壤中放线菌的选择性分离及其多样性,S154.3
  15. 力生长因子E肽促进骨愈合及含E肽生物活性材料的研究,R318.08
  16. 基于复合铁酶促活性污泥法及新型悬浮填料强化的城市污水深度脱氮除磷技术研究,X703.1
  17. 3,5-二氯水杨醛酰腙第一过渡系金属配合物的合成,晶体结构及生物活性研究,O641.4
  18. SiO_2对钙磷酸盐微晶玻璃晶相组成及生物活性的影响,R318.08
  19. 溶胶-凝胶法在多孔钛表面制备羟基磷灰石涂层,R318.08
  20. 人溶菌酶融合基因在毕赤酵母中的表达研究,Q78
  21. 水溶性聚合物络合—超滤耦合技术处理Sn~(2+)和Zn~(2+)废水的研究,X703

中图分类: > 农业科学 > 林业 > 林业基础科学 > 森林土壤学
© 2012 www.xueweilunwen.com