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DSPP、Enamelin基因片断的克隆及其在牙胚的表达检测

作　者: 唐清煌
导　师: 张彦定
学　校: 福建师范大学
专　业: 发育生物学
关键词: 原位杂交成牙本质细胞成釉质细胞 DSPP Enamelin
分类号: Q78
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

牙齿的发育与其他器官相似，也是依赖于预定牙齿发生部位的上皮组织与其下方的间充质之间的相互诱导而发生的，经过一系列有序和交互的作用，牙上皮分化为成釉质细胞，而间充质细胞分化为成牙本质细胞，各自合成分泌基质蛋白并最终形成牙釉质和牙本质。牙釉质和牙本质作为牙齿的代表性结构，可作为牙胚发育分化的形态学指标，检测成釉质细胞和成牙本质细胞的发育分化则可以从细胞生物学水平判断牙胚的发育分化情况。细胞的组织形态结构可以作为细胞发育分化的依据，但检测细胞的分化情况仅从组织学、形态学水平检测远远不够，必须建立分子水平的检测方法。为此，本实验克隆了人和小鼠的DSPP、Enamelin基因片断，然后制备特异性的人和小鼠DSPP、Enamelin基因片断的mRNA反义探针，再将其分别与人或小鼠含有成牙本质细胞或成釉质细胞的牙胚组织进行原位杂交，检测DSPP、Enamelin基因表达情况以此确定我们制备的4个探针的组织特异性及种属特异性，进而建立一种从基因转录水平检测人、小鼠成牙本质细胞或成釉质细胞分化以及干细胞在嵌合体中能否分化形成成牙本质细胞或成釉质细胞的方法。

全文目录

摘要  2-3
Abstract  3-4
中文文摘  4-6
目录  6-8
第1章绪论  8-24
  1.1 牙齿的发育  8-11
    1.1.1 牙齿的形态发育  8
    1.1.2 牙齿早期发育过程中上皮与间充质的相互作用  8-9
    1.1.3 上皮与间充质之间相互作用的分子机制  9-11
    1.1.4 生长因子及转录因子在上皮与间充质相互作用过程中的作用  11
  1.2 牙本质发生  11-16
    1.2.1 牙本质发生的基本过程  11
    1.2.2 成牙本质细胞分化机制  11-13
    1.2.3 成牙本质细胞的分化指标  13
    1.2.4 牙本质基质蛋白  13-15
    1.2.5 人、小鼠DSPP基因  15-16
  1.3 釉质发生  16-20
    1.3.1 成釉细胞的分化与釉基质的分泌  16-17
    1.3.2 釉质矿化  17-18
    1.3.3 牙釉质基质蛋白  18-20
    1.3.4 人、小鼠Enamelin基因  20
  1.4 牙齿再生  20-23
    1.4.1 牙齿再生研究进展  21-22
    1.4.2 牙齿再生的可能技术路线  22-23
  1.5 本研究的研究目的和意义  23-24
第2章实验材料  24-28
  2.1 主要仪器  24
  2.2 主要药品  24-25
  2.3 菌株和载体  25
  2.4 软件  25
  2.5 常用培养基和缓冲液  25-28
第3章实验方法  28-38
  3.1 序列分析及引物设计  28-30
  3.2 基因组DNA提取  30
  3.3 PCR扩增  30-31
  3.4 PCR产物的T-A克隆及其酶切鉴定  31-32
  3.5 序列测定及序列分析  32
  3.6 mRNA反义探针转录  32
  3.7 RNA电泳  32
  3.8 RNA纯化  32-33
  3.9 组织切片制备  33-34
    3.9.1 人牙胚的培养  33
    3.9.2 人、小鼠牙胚脱钙固定时间的确定  33-34
    3.9.3 组织切片及HE染色  34
  3.10 原位杂交  34-38
第4章结果与分析  38-50
  4.1 序列分析及引物设计结果  38
  4.2 PCR结果  38-39
  4.3 酶切鉴定  39-40
  4.4 测序结果的相似性比较及序列分析  40-44
  4.5 模板制备  44-45
  4.6 mRNA反义探针转录  45-46
  4.7 人、小鼠牙胚固定脱钙时间的确定  46-47
  4.8 原位杂交检测DSPP及 Enamelin 基因表达确认探针特异性  47-50
    4.8.1 原位杂交检测DSPP基因表达确认DSPP探针特异性  47-49
    4.8.2 原位杂交检测Enamelin基因表达确认 Enamelin探针特异性  49-50
第5章结论  50-52
  5.1 DSPP探针  50
  5.2 Enamelin探针  50-51
  5.3 移植人牙胚在裸鼠肾囊膜中的继续发育时间  51-52
附录一测序结果  52-56
附录二构建的质粒图谱  56-58
参考文献  58-62
攻读学位期间承担的科研任务与主要成果  62-64
个人简历  64-66
致谢  66

DSPP、Enamelin基因片断的克隆及其在牙胚的表达检测

内容摘要

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