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应用高效液相法检测血清中缺糖转铁蛋白对诊断酒精性肝病的意义

作　者: 冯志刚
导　师: 李忠信
学　校: 天津医科大学
专　业: 临床实验诊断学
关键词: 嗜酒酒精性肝病缺糖转铁蛋白唾液酸高效液相色谱
分类号: R446.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2004年
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内容摘要

目的在世界范围内的人群中，尤其在成年男性人群中酗酒是一个十分普遍的现象，它可能引发出一系列的社会问题如交通事故、犯罪，此外还引起一些疾病如酒精性肝病(alcoholic liver disease，ALD)，己成为较严重的公共卫生问题。在西方国家饮酒人群中酒精性肝病的患病率高达84％，酒精性肝病是导致肝硬化的最主要病因，长期嗜酒者中约有20％～30％可发展为酒精性肝硬化。在英国综合医院收治的各类肝硬化患者中，酒精性肝硬化占80％。近年来随着我国社会经济的发展和生活水平的提高，酒的生产和消耗不断增加，饮酒对人民群众的身体健康尤其是对肝脏的损害日益显现，酒精性肝病的发病率也明显增高，但是国内目前尚缺乏酒精性肝病的大规模流行病学调查资料。厉有名在浙江省开展的酒精性肝病流行病学调查数据显示：人群中酒精性肝病的患病率为4.34％，各亚型患病率分别为轻症酒精性肝损伤1.21％，酒精性脂肪肝0.94％，酒精性肝炎1.51％，酒精性肝硬化0.68％；并且患病率与每日酒精摄入量、饮酒年限和总酒精摄入量呈正相关。武汉市1992—1996年8183例肝硬化患者的调查表明，酒精性肝病导致的肝硬化占5.9％。酒精性肝硬化预后较差，5年生存率仅为23％～50％，明显低于非酒精性肝硬化。鲁晓岚等西安地区的流行病学调查数据显示，在调查的3613人中，总饮酒人数1270人，占总数的35.1％，男性1144人，占90.1％，为男性群体的52.2％；女性126人，占9.9％，为女性群体的8.9％。在饮酒人群中共检出酒精性脂肪肝78例(其中仅一例女性)，占饮酒人数的6.1％。虽然酒精性肝病的临床表现及影像学特点与其它原因所致的肝病有很多相似之处，但其又有一些固有的特点，尤其是一些血清学指标的变化。随着人们对酒精性肝病的研究的进展，不同的国家曾经提出过一系列的诊断标准。主要是从询问个人的饮酒史(饮酒量、频度、时程)、血清ALT、AST、GGT的升高和忌酒后的变化，平均红细胞容积(mean corpuscular volume，MCV)的升高，排除病毒性肝炎等主要指标和肝脏的影像学变化及一些辅助的血清天津医科大学硕士研究生论文中标志物，疑难病例确诊依靠肝脏组织活检。l’] 目前常用的诊断ALD的实验室指标主要有GGT、MCv、ALT、AST等，[5.“]其存在的共同的特点是早期诊断酒精性肝病的灵敏度有待提高，而且这些指标都是反映多种情况导致肝损伤的器官标志性指标，在病因学方面的特异性也不够理想。[7]自1976年Stibler等人在震颤患者的脑脊液和血清蛋白IEF电泳图谱中发现大量一种等电点>5.7的转铁蛋白异构体，忌酒后又消失后来证实是含有0一，1一，2一个唾液酸残基的转铁蛋白，stibler将其统称为缺糖转铁蛋白(carbohydrate deficient transfe币n，CDT)，并将其应用在长期嗜酒的诊断方面。此后开发的检测方法有很多，分离CDT和非CDT组分的技术有等电聚焦电泳IEF[sl、阴离子交换柱I9]、高效液相色谱即Lcl，”]、毛细管电泳(e即111脚eleetrop加resis，eE)[川、毛细管区带电泳(c即111娜zoneelectrop加resis，ezE)[，2，’31和毛细管亲和电泳[，41等，定量enT组分有放射免疫试验刃A、免疫固定染色、酶催化底物显色、免疫比浊测定[l’]、质谱分析[’6]等技术，商业试剂盒也有很多包括%cDT-RIA加(Ph~ia&u功ohn，1993)、o，oen几etTM(瓜15)、eoTeet一ExATMo，o(Phannacia&uPjo恤)、o，oen下TIATM(瓜15)、o，oeD拓一Tx尸M(Bio一Rad)和e址。认leol.D.TM，[，7]以及使用HPLC作为分离方法的Recipe试剂盒。在国外CDT已经广泛地应用于职业病和法医学领域，是检测慢性嗜酒和诊断ALD的较为理想的一个指标。国内对CDT的报道见于虞朝辉等对CDT的介绍[’“l和应用IEF检测cDT的研究，[，9]本文的目的在于应用HPLC检测酒精性肝病患者血清中CDT水平，为CDT在国内临床的应用和推广做一些工作。方法分离转铁蛋白异构体中的CDT组分和非CDT组分的基本原理在于这些异构体具有不同的等电点。血清转铁蛋白的等电点受以下三个变异影响:转铁蛋白结合铁离子的数目存在从0一2个的差别;转铁蛋白的基因变异即多肤链上氨基酸的变异;结合在多肤链上的寡聚糖链末端的唾液酸残基的数目存在从0一7个的差别。血清经过铁饱和处理可以使转铁蛋白结合两个铁离子从 4 天津医科大学硕士研究生论文而消除结合的铁离子的数目的差别，而转铁蛋白的基因变异在人群中的发生率很低，一般都不足1%。这样影响转铁蛋白的等电点的因素只需考虑多肤链上结合的唾液酸残基的数目。本文中将血清经过三氯化铁铁饱和、硫酸葡聚糖沉淀脂蛋白处理后，在PH6.2的缓冲液条件下，使用一根Mono Q HRS/5阴离子交换柱，采用高效液相色谱技术将转铁蛋白异构体加以分离，根据饱和的铁蛋白在460nm波长的特异性吸收，使用光电二极管阵列检测器在46Onm处进行检测。其中p巧.7和5.9的两种异构体分别对应含有0一，2一个唾液酸残基的转铁蛋白作为CDT，1一Tf由于量微在阴离子交换柱上的分离效果不好，?

全文目录

中英文常用缩略语  3-4
中文摘要  4-7
英文摘要  7-10
前言  10-12
材料和方法  12-15
结果  15-20
讨论  20-41
小结  41-42
参考文献  42-48
致谢  48

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