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RNA干扰抑制EB病毒LMP-1基因表达对鼻咽癌细胞转移能力影响的实验研究

作　者: 李刚
导　师: 李湘平
学　校: 第一军医大学
专　业: 耳鼻咽喉科学
关键词: 鼻咽癌转移 EB病毒潜伏膜蛋白-1 RNA干扰
分类号: R739.63
类　型: 硕士论文
年　份: 2004年
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内容摘要

目的： 1 探讨能否应用人工合成siRNA诱导RNA干扰，抑制鼻咽癌细胞中EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP-1)的表达。 2．观察LMP-1基因沉默对鼻咽癌细胞转移能力的影响。 3．探讨shRNA表达载体诱导RNA干扰技术在LMP-1基因的功能研究及抗转移基因治疗中的应用价值。方法：人工合成4条不同序列的双链siRNA，采用脂质体转染法导入鼻咽癌细胞后，根据半定量RT-PCR检测到的LMP-1 mRNA水平变化，筛选出有效的RNA干扰序列。根据有效干扰序列构建shRNA表达载体，导入EB病毒(+)的鼻咽癌细胞C666-1，筛选出LMP-1基因沉默的亚株。通过观察该业株细胞贴壁生长能力、基底膜穿透能力和移动能力的变化，分析LMP-1基因沉默对鼻咽癌细胞转移能力的影响。结果：在4个候选序列中筛选出1有效干扰序列。导入该siRNA后，C666-1细胞中LMP-1 mRNA水平下降90％以上，初次转染后36小时重复转染，能够增强基因抑制效果，延长有效干扰时间。 shRNA表达载体转染后，筛选出LMP一1基因沉默的C666一1亚株，在EBNA一1及GAPDH等无关基因不受影响的情况下，LMP一1的表达受到稳定抑制，达到接近“基因敲除”的效果。与对照组相比，LMP.1基因沉默的鼻咽癌细胞，贴壁生长能力提高，基底膜穿透能力和细胞移动能力均明显下降。结论:1.人工合成siRNA诱导RNA干扰，能够有效抑制鼻咽癌细胞C666一1中LMP一1基因的表达。2.shRNA表达载体也能够在鼻咽癌细胞内诱导RNA干扰，并获得对LMP一1基因稳定的抑制。3.LMP一1基因可能通过贴壁生长能力，基底膜穿透能力和细胞移动能力等不同方面影响鼻咽癌细胞的转移。4.人工诱导RNA干扰抑制LMP一1基因表达，有可能成为鼻姻癌抗转移基因治疗的有效策略。

全文目录

缩略词表  4-5
中文摘要  5-7
英文摘要  7-9
前言  9-12
材料和方法  12-20
结果  20-26
讨论  26-32
结论  32-33
参考文献  33-38
发表相关论文  38-39
附图  39-42
综述  42-50
致谢  50

RNA干扰抑制EB病毒LMP-1基因表达对鼻咽癌细胞转移能力影响的实验研究

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