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栗疫菌低毒性病毒（CHV1）遗传多样性研究

作　者: 刘福秀
导　师: 王克荣
学　校: 南京农业大学
专　业: 植物病理学
关键词: 栗疫菌低毒力传递转化率低毒力病毒遗传多样性 RT-PCR RFLP
分类号: S436.64
类　型: 硕士论文
年　份: 2004年
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内容摘要

本研究以栗疫菌(Cryphonectria parasitica)及其低毒力病毒(Cryphonectria hypovirus，CHV1)为材料，进行CHV1的遗传多样性及其生防潜力研究。采用配对转化和室内、大田接种的方法研究栗疫菌低毒力的传递和生防潜力。作者从12个配对中得到了6个转化菌株。结果表明不同的dsRNA供体菌和受体菌配对转化的效率是不同的，转化率从0到100％不等。室内枝段接种和大田接种测定的毒力表明，6个转化菌株、12个供体菌株、6个不能转化的受体菌+供体菌、6个转化菌株+供体野生型菌株处理的相对毒力都在80％以下，四者之间没有显著性差异，比12个受体菌和12个供体野生型菌株的毒力都低，表现低毒力或中等毒力，前四者与后两者的差异都达到极显著水平，而供体野生型菌株的毒力(相对毒力72.73-108.69％)与受体菌的毒力差异不显著。实验表明低毒力菌株的生防潜力比预期的高。采用序列测定与RFLP相结合的方法对来自中国、日本和意大利的共43个栗疫菌低毒性病毒(CHV1)遗传多样性进行了分析，试图明确欧洲CHV1病毒的起源。测定了30个病毒的部分序列，根据测序结果可将其分为29个单元型，分属于三个不同的亚型：中国菌株的病毒群体归属于亚型Ⅰ和Ⅲ；日本病毒群体除Ja55属于亚型Ⅲ外，其余属于亚型Ⅱ；意大利病毒群体除IT192属于亚型Ⅰ外，其余都属于亚型Ⅲ。中国CHV1病毒群体的地理分布有一定的特点：亚型Ⅰ主要分布在长江以北，其中只有09314(湖南)例外，而亚型Ⅲ主要分布在长江以南，但228(北京)、235(北京)、277(辽宁)例外。这不同于欧洲主要以一种亚型为主的情况，表明各群体之间存在着一定的基因流动。43个菌株共得到了4种限制性酶切图谱，Ⅰ型图谱占绝大多数，43个供试菌株中有31个属于Ⅰ型图谱。结果表明中国CHV1病毒群体的遗传多样性比日本群体和意大利群体的多样性都丰富，且意大利的病毒群体与中国群体的遗传相似性大于意大利群体与日本群体的遗传相似性，表明欧洲CHV1病毒可能起源于中国。

全文目录

中文摘要  6-7
英文摘要  7-9
引言  9-11
上篇文献综述  11-27
  文献综述  12-27
    1 病毒的群体遗传学研究  12-13
      1.1 病毒群体遗传学研究范畴  12-13
      1.2 病毒的变异  13
    2 病毒群体遗传学研究中的遗传标记  13-17
      2.1 dsRNA电泳图谱分析  13-14
      2.2 T1核酸酶酶切后寡核苷酸的双向电泳图谱分析  14
      2.3 核酸酶保护分析  14
      2.4 RFLP分析  14-15
      2.5 单链构象多态性分析  15-16
      2.6 异源双链分析  16
      2.7 变性梯度凝胶电泳分析  16-17
    3 低毒性dsRNA病毒的群体遗传学研究进展  17-27
      3.1 栗疫病及其低毒性dsRNA病毒的发现  17-19
      3.2 dsRNA在栗疫菌群体中的传递及影响传递的因素  19-20
      3.3 栗疫病的生物防治  20-21
      3.4 dsRNA的分子特征及其生物学功能  21-23
      3.5 dsRNA病毒与栗疫菌的互作  23-24
      3.6 栗疫菌及其dsRNA病毒的生物多样性  24-27
下篇研究内容  27-60
  第一章栗疫菌低毒力的转化及转化菌株的毒力测定  28-44
    1 材料与方法  30-34
      1.1 试验材料  30
      1.2 研究方法  30-34
    2 结果与分析  34-41
      2.1 低毒力转化效率  34
      2.2 低毒力菌株野生型的分离  34-41
    3 结论与讨论  41-44
  第二章栗疫菌低毒性病毒(CHVl)遗传多样性研究  44-60
    1 材料和方法  46-50
      1.1 供试菌株  46
      1.2 dsRNA的提取、检测和纯化  46
      1.3 cDNA的合成  46
      1.4 PCR扩增及其产物的回收  46-49
      1.5 序列测定  49-50
      1.6 RFLP分析  50
      1.7 数据分析  50
    2 结果与分析  50-56
      2.1 RT-PCR产物回收  50-51
      2.2 序列比较  51-54
      2.3 RFLP图谱  54-55
      2.4 群体间的遗传分析  55-56
    3 结论与讨论  56-60
参考文献  60-70
致谢  70

栗疫菌低毒性病毒（CHV1）遗传多样性研究

内容摘要

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