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小鼠原代细胞彗星试验的建立及应用

作　者: 张青碧
导　师: 衡正昌
学　校: 四川大学
专　业: 劳动卫生与环境卫生医学
关键词: 彗星试验肝原代细胞 DNA损伤遗传毒性氯化消毒副产物
分类号: R115
类　型: 硕士论文
年　份: 2003年
下　载: 196次
引　用: 2次
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内容摘要

彗星试验(comet assay)又称单细胞凝胶电泳(single cell gel electrophoresis assay，SCGE)，是一种在单细胞水平上检测DNA损伤与修复的方法。该方法具有简便、快速、灵敏、所需样品量少、重复性好、无需放射性标记等优点，可用于体内外各种实验，已迅速成为近年最广泛应用的DNA损伤检测方法。随着该技术的发展、成熟和完善，已被引进环境卫生学领域，在检测和评价环境因素的遗传毒性、环境与职业人群的生物监测、环境生态监测、环境流行病调查等方面，发挥着重要的作用。目前彗星试验多采用细胞株，细胞株可以通过细胞培养获得，相对说，细胞培养技术复杂、试验周期长、费用高。因此本研究试图筛选一种取材方便、制作简单、价格低廉、省时、经济、实用的动物原代细胞应用于彗星试验，同时与彗星试验常用的受试细胞V79细胞进行对比研究，拟建立小鼠原代细胞彗星试验，并用新建方法对泸州市饮用水遗传毒性进行检测，对新方法的可靠性和实用性进行初步评价。本研究以小鼠肝、脾、肾细胞作为受试细胞，用重铬酸钾作为受试物进行彗星试验。其结果显示三种细胞在彗星试验中均有小鼠原代细胞彗星试验的建立及应用一定的敏感性，但肝细胞的敏感性更高，且细胞自身具有一定的活化能力，因此筛选出小鼠原代肝细胞作为彗星试验的受试细胞。并与V79细胞进行对比研究，结果小鼠原代肝细胞比V79细胞更为敏感。沪州市区位于长江上游、沱江下游，受到上游城市工农业废水、生活污水的严重污染，但对该地区饮水遗传毒性研究未见报道。本研究拟用已建立的小鼠肝细胞彗星试验对沪州市主要供水水厂南郊水厂的水源水、出厂水、自来水的致突变性进行研究，同时用AmeS试验对同一水样进行了对比研究，初步验证小鼠肝细胞彗星试验在饮水遗传毒性监测方面的可靠性和优越性。结果显示:Ames试验只都能检测出消毒后饮用水的致突变性，而彗星试验能同时检测出水源水和氯化消毒饮用水的致突变性，且检测闭值远远低于AmeS试验(彗星试验为0.IL/皿，Ames试验为3.OL/皿)，其敏感性提高近30倍。结果证明肝细胞彗星试验用于饮水遗传毒性检测比AmeS试验更为敏感、简便、快速、经济。综上所述，本研究建立的小鼠肝细胞彗星试验具有取材方便、细胞制备简单、不需细胞培养和细菌培养、不需体外活化、经济、快速、敏感等优点，该试验在环境生态的遗传毒性检测方面具有广泛的应用前景。

全文目录

中文摘要  4-6
英文摘要  6-9
前言  9-11
第一部分小鼠原代细胞彗星试验方法的建立  11-24
  前言  11
  材料与方法  11-17
  结果  17-19
  讨论  19-21
  结论  21-24
第二部分小鼠肝细胞彗星试验对泸州市饮用水遗传毒性检测  24-32
  前言  24
  材料与方法  24-26
  结果  26-28
  讨论  28-29
  结论  29-32
第三部分 Ames试验对泸州市饮用水遗传毒性检测  32-39
  前言  32
  材料与方法  32-35
  结果  35-37
  讨论  37-38
  结论  38-39
主要参考文献  39-42
文献综述  42-57
  综述参考文献  52-57
致谢  57

小鼠原代细胞彗星试验的建立及应用

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