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三氧化二砷联合GM-CSF对急性早幼粒细胞白血病细胞的分化作用研究

作　者: 李迎春
导　师: 刘云鹏
学　校: 中国医科大学
专　业: 内科学
关键词: As2O3 GM－CSF APL 原代培养 凋亡 分化
分类号: R733.71
类　型: 硕士论文
年　份: 2002年
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内容摘要


前言 三氧化二砷（As2O3）是治疗急性早幼粒细胞白血病（APL）和对维甲酸（RA）抵抗的APL的重要方法。研究表明As2O3体外诱导APL细胞部分分化和凋亡，其机理为As2O3降解PML／RARa融合蛋白。临床研究则提示诱导细胞分化是As2O3治疗APL病人的主要机理。另外，As2O3还诱导其它AML细胞以及淋巴瘤、食管癌等多种肿瘤细胞凋亡。然而，As2O3严重的毒副作用如肝细胞损伤、心功能不全、类维甲酸综合征等，限制了其临床广泛应用。据文献报告，采用低剂量As2O3治疗可获得较高的临床完全缓解率而毒副作用较轻，但是其远期效应的观察资料不足。因此，有必要深入研究As2O3对APL的作用机理，寻找新的应用方法，以提高疗效或减轻毒副作用。 重组人细胞刺激因子GM-CSF具有潜在的促增殖和诱导细胞分化的作用。Muto等报告单用As2O3诱导耐RA的APL细胞株UF-1细胞凋亡，而联合GM-CSF却诱导UF-1细胞向粒细胞系分化。但是，As2O3联合GM-CSF在APL病人体内是否也有相似的作用，尚未见报告。 为了研究As2O3诱导APL细胞分化作用，以及As2O3联合GM-CSF对APL细胞特别是APL原代细胞的影响，我们观察了As2O3和GM-CSF对NB4细胞和12例APL病人原代培养的细胞的作用。 AS刀。购于哈尔滨伊达药业有限公司；ATM、NBT、TPA。Mw、DMSO购于 Siglna 公司；CDllb－FITC购于 Coalter。unol－Ogy公司；GM－CSF购于 KIRIN公司；淋巴细胞分离液购于上海恒信化学试剂有限公司；nyMll640购于 GIBCO BRL USA；胎牛血清购于天津血液研究所。 二、实验仪器 COZ培养箱＼水浴箱、流式细胞仪(FACScan Becton DickisonUSA人倒置显微镜、光学显微镜、细胞涂片离心机＼离心机、酶标仪（BIO—RAD550）。 实验 方 法 一、细胞培养 新鲜的 APL细胞来源于 11例初诊的 APL病人和二例复发病人的骨髓标本。分离单个核细胞，采用白血病细胞＞乃助的标本。APL原代细胞初种浓度二．0 X 10e／all0B4细胞（由 Mllt。教授赠送L初种浓度为 1．0 X 10’／d，于含有 10－20％胎牛血清和12U／Inl庆大霉素的 RPMll640，于 37℃3％CO。、饱和湿度的培养箱进行培养。 二、细胞增殖和活力测定 采用 Mrt法和／或台盼兰拒染法测定。 三、细胞凋亡的检测 瑞氏一姬姆萨染色，光学显微镜下观察细胞形态。 四、细胞分化的检测 1．形态学分析：采用瑞氏一姬姆萨染色，在显微镜下观察细胞形态。 2．NBT还原试验：计数200个细胞，计算NBT阳性百分比。 3．细胞表面分化抗原CDllb检测：采用流式细胞仪检测。 ·2· 五、统计学分析 采用 SPSS统计软件分析—－ilcoxon signed rank检验。 实验结果 一人Sp。对APL细胞株NB4细胞的作用 1．0．二一2．opM As。O。处理l一72／J＼时，As。O3以时间、剂量依赖的方式抑制NB4的增殖。72 ／J’时IC。。为0．75tiM。 2．二．0－2刀卜M AS。O。处理 24－72小时，光学显微镜下可见。细胞膜趋完整，染色质固缩、核碎裂，及凋亡小体形成。 3．0．二＊．0 pM AS刀。处理 6天，显示一定程度的成熟粒细胞的特征：核浆比值略变小，染色质密集固缩，胞浆呈泡沫感，但是晚幼粒样细胞极少。＊＊T阳性率＜5啪，＊9fib表达显著增加。 4．GM－CSF10ng／rnl对细胞增殖和分化无显著影响，联合ASp。处贴，形态学分化改变比单用AS刃。处理略明显，NBT阳性率无增加，CDI fo表达增加无差别。 二人Sp。及GM－CSF对APL原代培养细胞的作用 1．ASp。；以剂量依赖方式抑制细胞活力并诱导部分细胞凋亡 1刀一2．opM Asp。处理APL细胞，6八2例活细胞数显著减少，并可见凋亡特征性的核碎裂细胞及凋亡小体。另外6例对ASp。不敏感，凋亡细胞极少。提示不同病人的 APL原代细胞对As刃。药物敏感性不同。AsN。联合GM－CSF10nyml处理后，2／12例凋亡细胞明显减少，另外10例与单用AS。O。无显著差异。 2．GM－CSF增强AS刃。诱导分化的作用 0．1一二．opM Asp。处理6天，5／12例显示分化的形态学改变，NBT阳性率均增加，范围在10－78％，其中3例表达CDllb。Asp。联合GM－CSF10ng／Inl处理后，9／12例显示分化的形态改变，NBT阳性率均增加，范围在10－75％，其中7例表达CDllb。 ·3·l八 例自发分化，l八2例单用 GM—CSF可诱导细胞分化。3八例单用和联合处理均无分化改变。 讨 论 研究表明AS。O。诱导APL细胞部分分化和启动细胞凋亡，也可以诱导非APL白血病、恶性淋巴瘤、食管癌等细胞凋亡及周期阻滞。 本实验表明AS刃。诱导NB4细胞部分分化，包括形态改变和分化抗原CDI fo表达增加，但是NBT还原功能缺如。而42％瞩／12例）APL原代细胞，不仅形态趋向成熟，而且具有NBT还原能力并表?

全文目录


一、 中文摘要  3-8
二、 英文摘要  8-16
三、 英文缩略语  16-17
四、 前言  17-18
五、 实验材料  18-19
六、 实验方法  19-21
七、 实验结果  21-25
八、 讨论  25-28
九、 结论  28-29
十、 论文图片  29-36
十一、 参考文献  36-42
十二、 致谢  42-43
十三、 个人简介  43

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 造血器及淋巴系肿瘤 > 白血病 > 急性白血病
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