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益肾化瘀汤促进骨髓抑制模型大鼠巨核系造血的机制研究

作 者: 黎建云
导 师: 刘元生
学 校: 汕头大学
专 业: 内科学
关键词: 补肾化瘀汤 骨髓抑制模型 巨核细胞集落形成单位 5-羟色胺 酮色林
分类号: R285.5
类 型: 硕士论文
年 份: 2010年
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内容摘要


背景及目的:再生障碍性贫血是血液系统常见病,由多种原因造成骨髓造血功能衰竭,以全血细胞减少为特征的一种临床综合征。中医学中虽无“再障”此病名记载,但根据其主要临床表现可归属于“虚劳”、“血症”范畴,其“肾虚血瘀致日久气血两亏”的发病机理日益受到学者们的重视,已证实益肾化瘀疗法对再生障碍性贫血有肯定的疗效,研究表明该疗法通过改善骨髓造血微环境、调节造血正负调控因子以及抑制造血细胞的过度凋亡从而改善骨髓的造血机能,但现有的研究结果并未解释其全部机理。中医理论强调整体辨证施治,重视脏腑之间联系。肾主骨生髓藏精,精血同源,故肾虚与“血症”关系密切,此外髓充为脑,肾虚也与许多神经系统疾病相关。近年来多项研究发现神经系统与造血调控有密切关系。5-羟色胺是一种吲哚胺,在中枢及外周神经系统中有着重要生理作用,同时它也是一种造血生长因子,已证实5-羟色胺能促进巨核细胞的增殖,在体外能扩增CD34+细胞,与多巴胺协同调控粒系造血。神经系统研究发现补肾活血类中药可通过调节中枢5-羟色胺的分泌及多巴胺能神经功能而影响大脑功能,提示造血系统与神经系统之间关系可能通过5—羟色胺联系。基于上述论据,提出益肾化瘀疗法治疗血症的机理之一是通过调节5—羟色胺及其受体表达调节造血。我们前期研究已成功建立急性骨髓抑制SD大鼠模型,并证实补肾化瘀汤可促进急性骨髓抑制模型SD大鼠骨髓造血、减轻其骨髓间质水肿和提高血浆5羟色胺浓度,同时发现5-HT浓度升高与造血恢复呈正相关。本研究进一步探讨益肾化瘀汤是否通过5-羟色胺受体促进急性骨髓抑制模型大鼠巨核系造血,从而完善补肾化瘀中药治疗血症的机理研究,深化对中医脏腑联系、辨证施治原理的认识。方法:32只SD大鼠随机分为4组,每组8只,分别为:空白对照组;模型对照组;中药组;中药+5羟色胺受体拮抗剂酮色林组。造模采用5-FU联合白消安化疗法,造模第一天予5-FU (150mg/kg)腹腔注射,第五天白消安(15mg/kg)灌胃一次,此后每周给予白消安一次,连续3周,酮色林2mg/(kg.d),对照组予等量生理盐水相同方法处理。造模完成后第二天予补肾化瘀汤(生药2g/ml),0.2ml/10g,连续灌胃16天,空白及模型对照组予等体积生理盐水灌胃,第16天脱臼处死大鼠,采用密度梯度离心法(大鼠淋巴细胞分离液)获取骨髓单个核细胞并用0.4%台盼蓝染色计数;流式细胞仪检测BMMC表面CD41和5-HTR2A的表达情况;最后用巨核细胞胶原蛋白培养基行巨核细胞集落培养,观察巨核细胞集落及粒单核细胞集落产率。结果:(1)大鼠骨髓单个核细胞计数(BMMC):益肾化瘀汤可显著提高急性骨髓抑制模型大鼠骨髓单个核细胞计数,该效应可被酮色林抑制。(2)巨核细胞集落(Mk-CFU)和混合巨核细胞集落计数(mix-Mk-CFU):益肾化瘀汤可提高模型大鼠Mk-CFU和mix-Mk-CFU计数,该效应可被酮色林抑制。(3)粒单核细胞集落计数(GM-CFU):益肾化瘀汤可提高模型大鼠GM-CFU计数,而酮色林不能有效抑制该效应。(4)流式细胞分析计数检测BMMC表面CD41、5-HT2A R表达:益肾化瘀汤可上调模型大鼠BMMC表面CD41、5-HT2AR表达,酮色林仅能抑制CD41表达,而对5-HT2AR表达无影响。结论:(1)益肾化瘀汤可通过上调5-HT2AR表达促进急性骨髓抑制模型大鼠巨核祖细胞生长。(2)大剂量酮色林体内可选择性阻断益肾化瘀汤的促巨核祖细胞生长作用,但对粒单核祖细胞生长影响不明显,其机制尚不清楚,有待进一步研究。

全文目录


中文摘要  3-5
英文摘要  5-8
英文缩写词汇表  8-10
目录  10-11
第1章 前言  11-19
第2章 实验设计  19-20
第3章 材料与方法  20-27
  3.1 试剂、仪器和实验动物  20-22
  3.2 实验方法  22-23
  3.3 动物分组和急性骨髓抑制模型的建立  23-24
  3.4 各实验组给予补肾化瘀中药汤  24
  3.5 实验组大鼠骨髓单个核细胞采集  24-25
  3.6 骨髓单个核细胞计数  25
  3.7 巨核细胞集落胶原蛋白半固体培养  25
  3.8 乙酰胆碱醋酶染色及苏木素复染计数巨核细胞集落形成单位、巨核细胞集落中巨核细胞数、粒单核细胞集落形成单位和混合细胞集落形成单位  25-26
  3.9 流式细胞仪检测BMMC CD41、5-HTR2A表达  26
  3.10 统计学处理  26-27
第4章 结果与附图  27-36
  4.1 益肾化疲汤药对急性骨髓抑制模型大鼠骨髓单个核细胞影响  27
  4.2 各组大鼠巨核细胞集落形成单位计数  27-28
  4.3 各组大鼠粒单核细胞集落和混合巨核细胞集落计数  28-29
  4.4 各组大鼠骨髓单个核细胞CD41和5-HTR2A表达变化  29-30
  附图  30-36
讨论  36-42
结论与展望  42-43
参考文献  43-47
文献综述  47-53
致谢  53

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