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结缔组织生长因子、核转录因子在糖尿病大鼠肺中的表达及苦参碱的干预作用

作　者: 寿璐
导　师: 周建英
学　校: 浙江大学
专　业: 内科学
关键词: 结缔组织生长因子 核转录因子-кB 糖尿病 苦参碱 大鼠 肺纤维化 实时定量PCR
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


前言肺间质纤维化(pulmonary interstitial fibrosis, PF)是一种原因不明、发病机制不清、缺乏治疗手段的致命性弥漫性肺间质病。近年来,越来越多的文献报道结缔组织生长因子(connective tissue growth factor, CTGF)与多种组织器官纤维化有密切的关系。由于病因复杂,发病机制尚未完全阐明,临床治疗效果不理想。近年来随着对中医中药研究的深入,国内研究证实苦参碱(Matrine)在抗肝脏、肾脏纤维化中有一定的疗效,但有关其对肺纤维化的作用,目前仍未见报道。多种因素产生的肺损害均可导致肺纤维化的发生。近年来,糖尿病(diabetes mellitus, MD)对肺的影响逐渐引起了大家的重视,已证实肺组织是DM损害的重要靶器官。有研究认为肺部病变可能与高血糖引起的非酶糖基化反应和糖基化终产物积累有关,肺赖氨酸氧化酶活性升高,氧化应激可能也是DM肺部病变的重要发病机制。DM是一种炎症反应,作为细胞内炎症信号转导通路的调控中心的核转录因子-κB(nuclear transcription factor-κB, NF-κB)也在肺部病变中起重要作用。但DM能否导致肺纤维化目前国内外鲜有报道。目的观察DM肺的病理改变,研究CTGF、NF-κB的表达情况,探讨肺部病变可能的作用机制,并为临床药物治疗找寻新的靶点。方法雄性SD大鼠,随机分为3组：1.对照组；2.模型组；3.苦参碱组。通过腹腔注射链脲佐菌素(STZ 55mg/kg腹腔注射1次)建立DM模型,苦参碱组在此后每天腹腔注射苦参碱(Matr.15mg/kg)5周。对照组注射相应剂量0.9%生理盐水。分,别在4周和6周处死大鼠,观察肺系数比,检测羟脯氨酸(HYP),进行CTGF.NF-κB检测,并观察光学显微镜下肺损伤的程度。本实验通过实时定量RT.PCR测定各组中CTGF的含量,并用Western Blot检测NF-κB的蛋白表达水平,观察各自在DM肺中的表达情况及其与肺纤维化的关系,探讨其可能的发病机制。结果1.DM大鼠肺出现纤维化改变：本实验通过腹腔注射链脲佐菌素诱导大鼠形成DM,以随机血糖>16.7 mmol/L,尿糖强阳性作为DM动物模型建立标准。在实验4周和6周时DM大鼠肺在显微镜下出现肺泡炎、肺纤维化样改变,肺组织中HYP含量上升,并随着病程逐渐增加。6周时肺系数增加,模型组的肺系数(1.369±0.204)与对照组(0.851±0.201)比较明显升高(P<0.05),HYP含量增加,与对照组比较结果有统计学差异,显微镜下肺纤维化样改变明显。以上均为肺纤维化的基本特征,提示DM导致肺纤维化。2.模型组CTGF、NF-κB表达增加：实时定量RT-PCR检测发现DM模型中CTGFmRNA的量逐渐上升,比正常对照组上升了约5.6倍(4周,P<0.01)和6.1倍(6周,P<0.01)。Western-Blot检测显示,在正常肺组织中有低水平的NF-κB/p65表达,诱导大鼠形成DM4周时肺组织中NF-κB/p65表达明显增高,达到正常对照组的4.4倍(P<0.01),6周时为4.2倍(P<0.01).3.苦参碱能抑制DM大鼠肺中CTGF、NF-κB/p65的表达：6周时苦参碱组肺系数(0.960±0.314)较模型下降(P<0.05),HYP含量较模型组下降(P<0.05),显微镜下观察肺泡炎、肺纤维化样程度较模型组减轻(P<0.05,P<0.01)。实时定量RT-PCR检测发现4周时苦参碱组CTGFmRNA的量上升,为正常对照组的约2.9倍(P<0.05),比DM模型下降了22.6%(P<0.05),6周时为正常对照组的2.1倍(P<0.05),比DM模型组下降了55.9%(P<0.01)。Western-Blot检测显示,4周时苦参碱组NF-κB/p65的量上升,比正常对照组上升约为2.6倍(P<0.05),比DM模型下降了42.5%(P<0.01),6周时比正常对照组上升约为2.2倍(P<0.05),比DM模型下降了46.7%(P<0.01)。提示苦参碱能够在一定程度上抑制CTGF、NF-κB/p65的表达,减轻肺纤维化。结论DM能导致肺损伤,并逐渐形成肺纤维化,在DM肺中CTGF、NF-κB的表达上升,苦参碱能减少DM肺中CTGF、NF-κB的表达,减轻纤维化程度,提示DM肺纤维化可能与CTGF、NF-κB的过度表达有关,苦参碱能在一定程度上减轻肺纤维化。

全文目录


致谢  4-5
中文摘要  5-8
Abstract  8-11
缩略词表  11-12
目次  12-13
1 引言  13-17
2 材料与方法  17-28
  2.1 材料  17-19
  2.2 方法  19-28
3 结果  28-35
  3.1 肺系数的计算  28
  3.2 肺组织形态学观察  28-31
  3.3 HYP测定  31
  3.4 RT-PCR法检测CTGFmRNA  31-33
  3.5 Western Blot检测NF-κB/p65  33-35
4 讨论  35-38
5 结论  38-39
参考文献  39-43
综述  43-54
  参考文献  51-54
作者简历及在学期间发表的文章  54

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