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脑出血对神经细胞线粒体DNA缺失突变影响及褪黑素保护作用的实验研究

作　者: 张媚
导　师: 梅元武
学　校: 华中科技大学
专　业: 神经病学
关键词: 脑出血褪黑素线粒体DNA缺失实时荧光定量PCR SOD MDA
分类号: R743.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的:通过观察脑出血及褪黑素干预后大鼠神经元线粒体DNA4834bp缺失片段含量及脑组织SOD、MDA含量的动态变化,探讨线粒体mtDNA缺失突变在脑出血损伤机制中的作用,研究褪黑素对脑出血后线粒体DNA的保护作用及其机制。方法:将110只SD青年大鼠随机分为正常组10只,假手术组、脑出血组各50只,另将100只SD青年大鼠随机分为对照组、褪黑素干预组,组内随机分为造模术后12h、1d、2d、4d、7d共5个时间点,定向向脑内苍白球注入Ⅶ型胶原酶0.5U,建立脑出血模型(假手术组以生理盐水代替Ⅶ型胶原酶,正常组不做任何处理),褪黑素干预组于造模前10min腹腔注射1mg/ml的褪黑素10ml/kg(对照组以等量生理盐水代替褪黑素)。巢氏聚合酶链反应(nPCR)检测各组造模术后各时间点神经细胞线粒体mtDNA缺失突变情况,基因测序技术检测缺失片段序列,实时荧光定量PCR(RT-PCR)对各组大鼠神经细胞野生型mtDNA和缺失型mtDNA含量进行定量分析,硫代巴比妥酸比色法检测脑组织丙二醛(MDA)的含量,黄嘌呤氧化法分别检测脑组织超氧化物歧化酶(SOD)的活性。结果:正常组、假手术组大鼠巢氏PCR方法均未检测出mtDNA缺失片断,脑出血组mtDNA4834缺失突变总发生率为54%,个体缺失的发生率呈时间依赖型关系,缺失的发生率随着出血后时间的增加呈上升趋势;实时荧光定量PCR结果示,脑出血组mtDNA4834缺失高于正常组和对应点的假手术组(P<0.05),且随着出血后时间的增加mtDNA4834缺失率呈上升趋势。脑出血后血肿周围脑组织SOD活性显著降低,在12h已下降,1d时达最低,以后缓慢上升,7d时仍低于正常组;MDA含量的改变则相反,出血后血肿周围脑组织MDA含量明显升高。干预实验中,褪黑素组mtDNA4834缺失率显著低于对照组(P<0.05)。褪黑素干预后SOD活力显著增高,并于1d时达到高峰;MDA含量改变则相反,褪黑素干预后MDA含量显降低。结论:脑出血启动了脑内神经细胞mtDNA4834缺失损伤,自由基氧化损伤与其相关;mtDNA4834缺失是脑出血后神经细胞继发性损伤机制之一;褪黑素对脑出血后线粒体DNA的缺失有抑制作用,其机制与减少氧自由基、降低脂质过氧化程度有关。

全文目录

中文摘要  5-7
Abstract  7-9
前言  9-11
1 材料与方法  11-23
  1.1 实验材料  11-13
  1.2 分组及脑出血模型的建立  13
  1.3 动物行为学和神经功能评分  13-14
  1.4 线粒体DNA 的提取  14
  1.5 常规PCR 扩增  14-16
  1.6 线粒体DNA 缺失的定量分析  16-20
  1.7 SOD 活性、MDA 含量测定  20-22
  1.8 统计学分析  22-23
2 结果  23-29
  2.1 常规PCR 产物鉴定  23-26
  2.2 线粒体DNA 缺失的定量分析  26-27
  2.3 各组大鼠SOD、MDA 的含量  27-29
3 讨论  29-34
  3.1 脑出血后血肿周围组织SOD、MDA 水平  29-30
  3.2 脑出血后血肿周围组织线粒体DNA 缺失情况  30-32
  3.3 褪黑素对脑出血后线粒体DNA 保护作用  32-34
4 结论  34-35
参考文献  35-37
综述  37-43
  参考文献  41-43
致谢  43-44
英文略缩表  44

脑出血对神经细胞线粒体DNA缺失突变影响及褪黑素保护作用的实验研究

内容摘要

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