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背景和目的：帕金森病(Parkinson’s Disease,PD)是一种常见于中老年人的慢性进行性神经变性疾病,其主要的临床表现为静止性震颤、肌强直、运动障碍以及平衡障碍,其主要的病理特征为黑质致密部多巴胺能神经元的缺失以及黑质-纹状体通路的变性。随着社会人口老龄化的进程加快,此病患病人数逐年增加,因此,对该病的研究已引起人们的广泛关注。帕金森病的发病机制至今仍不明确,有研究显示PD患者黑质致密部多巴胺(dopamine,DA)能神经元严重缺乏,黑质和纹状体DA减少,酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)的活性下降。DA是调节人体运动功能的重要分子,因此DA水平降低是引起PD患者运动障碍的主要原因。TH是DA合成的限速酶,因此增加TH的数量,提高TH的活性,可促进多巴胺能神经生长,保护多巴胺能神经的功能,提高PD患者运动能力。胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)在星形胶质细胞(Astrocyte,Ast)中含量丰富,在活性星形胶质细胞中GFAP的表达相对更多。各种脑损害均可刺激星形胶质细胞合成GFAP增多,这种神经胶质活跃的过程是星形胶质细胞对脑损伤的一种特有反应,出现星形胶质细胞增殖,细胞体和细胞核过度肿大,并且这种反应可持续存在,GFAP作为重要的标志,星形胶质细胞增殖的程度和脑组织损伤的程度可用GFAP的表达进行评定,有研究显示PD患者脑内GFAP含量明显增高,治疗后其含量下降,临床症状减轻。目前对帕金森病的治疗仍以药物治疗为主,可以减轻大部分患者的临床症状,但长期使用会出现较多的副作用,例如疗效减低、症状出现波动以及运动和精神障碍等等,并且不能阻止或延缓多巴胺能神经元的进行性丧失。因此,人们一直在寻找能够延缓、阻止甚至逆转神经变性的药物,保护神经元不受损失。康复训练在脑损伤患者治疗中所起的肯定作用,给PD治疗提供了新的启示和一线希望。本实验研究康复训练对帕金森病小鼠行为学、脑纹状体多巴胺及其代谢产物3,4-二羟苯乙酸(3,4-dihydroxyphenylacetic acid, DOPAC)和高香草酸(homovanillic acid, HVA)的含量、脑黑质酪氨酸羟化酶及胶质纤维酸性蛋白的影响,探讨康复训练提高帕金森病小鼠运动功能的可能性及其机制。方法：1.标本制备：健康C57BL/6J雄性小鼠96只随机分为正常组,假手术组,模型组和康复组,正常组不做任何处理,假手术组腹腔注射生理盐水后不做任何处理；模型组和康复组均腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢毗啶(1-Methyl-4-Phenyl-1,2,3,6-Tetrahydropyridine Hrdrochloride, MPTP)制备PD小鼠,造模成功后模型组不做任何处理,康复组每日行康复训练,共训练4周。2.在康复训练0周,1周,2周及4周后分别观察4组小鼠的行为学改变,并同时切取不同时间,不同组小鼠脑组织、切片,用高效液相色谱法检测小鼠脑组织内DA及其代谢产物含量,用免疫组织化学方法检测GFAP和TH的表达变化,并进行数据采集和分析。结果：1.康复训练后0周,模型组和康复组小鼠肢体功能明显减退,康复训练2周后,康复组小鼠肢体功能明显提高,模型组小鼠功能提高不明显,两组相比差异有显著性,康复训练4周后,模型组小鼠肢体功能仍提高不明显,两组相比差异有显著性。模型组小鼠在康复训练2周后与康复训练4周后相比,肢体功能差异无显著性。2.康复训练后0周,模型组和康复组小鼠纹状体内DA及其代谢产物含量明显减少,与正常组和假手术组相比有统计学差异；康复训练2周后,模型组DA及其代谢产物含量无明显变化,康复组DA及其代谢产物含量明显提高,两组相比有统计学差异；康复训练4周后,模型组DA及其代谢产物含量仍无明显提高,与康复组相比有统计学差异。模型组小鼠在康复训练2周后与康复训练4周后相比,脑内DA及其代谢产物含量差异无显著性。3.免疫组织化学染色显示未进行康复训练时,模型组和康复组小鼠TH阳性细胞数明显减少,与正常组或假手术组相比有统计学差异；康复训练2周后,康复组TH阳性细胞数明显增多,而模型组TH细胞数无明显增多,两组相比有统计学差异；康复训练后4周,模型组TH阳性细胞数增多不明显,与康复组相比差异有显著性。模型组小鼠在康复训练2周后与康复训练4周后相比,TH阳性细胞数差异无显著性。4.康复训练后0周,正常组及假手术组小鼠可见少量的GFAP阳性细胞,模型组及康复组GFAP数均明显增多,与正常组及假手术组相比差异有显著性；模型组与康复组无显著性差异。康复训练后4周,模型组小鼠GFAP阳性细胞数减少不明显,康复组GFAP阳性细胞数减少明显,与模型组相比差异有显著性。模型组小鼠在康复训练2周后与康复训练4周后相比,GFAP阳性细胞数差异无显著性。结论：1.小鼠腹腔注射MPTP后出现帕金森病行为学特征。康复训练可提高PD小鼠的肢体运动功能。2.康复训练可通过提高脑内多巴胺及其代谢产物含量改善PD小鼠肢体功能。3.康复训练可增加帕金森小鼠脑内TH的细胞数,从而引起脑内多巴胺含量增加,促进神经功能恢复,改善小鼠的行为。4.康复训练可减轻星形胶质细胞的活性,促进PD小鼠运动功能的恢复。
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