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雷公藤甲素对子宫内膜癌细胞株作用的实验研究

作　者: 蔡玉
导　师: 吴强
学　校: 南京医科大学
专　业: 妇产科学
关键词: 雷公藤甲素 子宫内膜癌 细胞系 细胞周期阻滞 凋亡
分类号: R737.33
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


目的:雷公藤甲素(triptolide)是从植物雷公藤中分离得到的二萜内酯化合物,是雷公藤的一种主要活性成分,长期用于免疫性疾病尤其是类风湿性关节炎等疾病的治疗,近期文献报道雷公藤甲素具有抗多种肿瘤细胞增殖,促进细胞凋亡的作用[1-2]。但雷公藤甲素对于子宫内膜癌细胞的抗肿瘤作用,至今尚未见报道。故本研究选择人子宫内膜癌细胞系HEC-1B和HHUA为研究对象,观察雷公藤甲素对人子宫内膜癌细胞体外生长特性的影响及其作用机制。方法:体外培养HEC-1B、HHUA细胞,与5-160ng/ml雷公藤甲素共育:(1)镜下观察细胞经雷公藤甲素作用24h、48h、72h后的生长情况;(2)采用MTT法检测雷公藤甲素处理24h、48h、72h后对HEC-1B、HHUA细胞增殖的抑制作用;(3)流式细胞仪检测经雷公藤甲素作用48小时后HEC-1B、HHUA细胞的凋亡率及细胞周期变化;(4)DNA片段分析法分析雷公藤甲素处理48h后细胞的凋亡断裂带。结果:(1)倒置相差显微镜下观察经雷公藤甲素作用后肿瘤细胞生长明显受到抑制;(2) MTT实验结果显示雷公藤甲素能抑制HEC-1B、HHUA细胞的生长,且生长抑制作用呈剂量及时间依赖性;在低浓度(5ng/ml)即可产生抑制,雷公藤甲素处理HEC-1B细胞72h后的IC50为6.6ng/ml;在5-160ng/ml的浓度范围内,雷公藤甲素对HEC-1B的抑制作用强于HHUA;(3)流式细胞仪检测显示雷公藤甲素在低浓度(5ng/ml)条件下,能诱导HEC-1B细胞发生细胞周期阻滞,主要阻滞部位在S期;高浓度(40ng/ml,80ng/ml)的雷公藤甲素使HEC-1B细胞主要阻滞在G2/M期,HHUA细胞阻滞于S期,并诱导其发生凋亡。雷公藤甲素对HEC-1B的影响较HHUA明显;(4)雷公藤甲素处理HEC-1B细胞48h后可见DNA梯形条带。结论:雷公藤甲素对子宫内膜癌细胞的生长有抑制作用,较低浓度下即可产生抑制,有时间剂量依赖性;对HEC-1B的影响较HHUA明显。其抑制肿瘤增殖的作用可能是通过诱导细胞凋亡及细胞周期阻滞实现的。提示雷公藤甲素有望成为子宫内膜癌治疗的一种有效药物。

全文目录


中文摘要  5-7
英文摘要  7-9
前言  9-15
  1. 雷公藤甲素简介  9
  2. 雷公藤甲素的药理学研究进展  9-11
    2.1 抗炎及免疫调节作用  9-10
    2.2 抗生育作用  10
    2.3 抗肿瘤作用  10-11
  3. 雷公藤甲素的毒理学研究进展  11-12
  4. 子宫内膜癌的治疗现状  12-13
    4.1 手术治疗  12
    4.2 放射治疗  12-13
    4.3 化疗  13
    4.4 内分泌治疗  13
  5. 本课题研究意义  13-15
材料与方法  15-23
  1 材料  15-17
    1.1 细胞株  15
    1.2 主要试剂  15
    1.3 试剂配制  15-16
    1.4 主要实验仪器  16-17
  2 实验方法  17-22
    2.1 细胞的复苏  17
    2.2 细胞的培养  17
    2.3 细胞的传代  17
    2.4 细胞的冻存  17-18
    2.5 细胞计数  18
    2.6 MTT 法检测雷公藤甲素对 HEC-1B、HHUA 细胞生长的抑制作用  18-20
    2.7 倒置相差显微镜下观察雷公藤甲素作用后细胞的变化情况  20
    2.8 流式细胞仪检测雷公藤甲素对细胞周期及凋亡的影响  20-21
    2.9 DNA 片段分析法  21-22
  3 统计学处理  22-23
结果  23-33
  1 MTT的检测结果  23-26
    1.1 雷公藤甲素对子宫内膜癌细胞 HEC-1B 的抑制作用  23-24
    1.2 雷公藤甲素对子宫内膜癌细胞 HHUA 的抑制作用  24-25
    1.3 雷公藤甲素对 HEC-1B 细胞的抑制作用强于 HHUA 细胞  25-26
  2 倒置相差显微镜观察结果  26-28
  3 流式细胞仪检测结果  28-32
    3.1 雷公藤甲素对 HEC-1B、HHUA 细胞周期的影响  28-29
    3.2 雷公藤甲素对HEC-1B、HHUA细胞凋亡的影响  29-32
  4 DNA Ladder 片段分析法结果  32-33
讨论  33-38
  1 雷公藤甲素抑制子宫内膜癌细胞系HEC-1B、HHUA的增殖  34-35
  2 雷公藤甲素诱导HEC-1B、HHUA发生细胞周期阻滞  35-36
  3 雷公藤甲素诱导HEC-1B、HHUA细胞凋亡  36-38
结论  38-39
参考文献  39-42
综述  42-53
  参考文献  50-53
攻读学位期间发表文章情况  53-54
致谢  54

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 泌尿生殖器肿瘤 > 女性生殖器肿瘤 > 子宫肿瘤
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