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新型金属铜络合物的抗肿瘤作用及机制研究

作　者: 齐晓宇
导　师: 张振中；徐霞
学　校: 郑州大学
专　业: 药物分析学
关键词: 新型金属铜络合物 抗肿瘤 光谱学 电泳 流式细胞术 腹水瘤
分类号: R96
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 67次
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内容摘要


目的:研究新型金属铜络合物（N-Cu）的体内外抗肿瘤活性及其作用机制。方法:1.采用MTT法测定新型金属铜络合物对5株人肿瘤细胞（人卵巢癌细胞（SKOV3）、人宫颈癌细胞（Hela）、人乳腺癌细胞（MCF7）、人食管癌细胞（EC9706）、人非小细胞肺癌细胞株（A549））增值的影响。2.对S180腹水瘤小鼠腹腔注射新型金属铜络合物溶液,观察其对小鼠体重、腹围、腹水体积、生存期及主要脏器的影响。3.采用流式细胞仪测定新型金属铜络合物对Hela细胞周期和凋亡的影响,探讨了新型金属铜络合物抗肿瘤活性的作用机制。4.应用了紫外吸收光谱、荧光光谱、Ct DNA热变形实验、粘度法、电泳法等不同的方法,研究了新型金属铜络合物与Ct DNA的相互作用方式以及不同条件下对DNA的切割作用,进一步探讨了新型金属铜络合物具有抗肿瘤活性的作用机制。结果:1.体外抗肿瘤活性:新型金属铜络合物对5种人肿瘤细胞株的增值均呈现出不同程度的抑制。MTT结果显示,新型金属铜络合物对SKOV3、Hela、MCF7、EC9706、A549的半数抑制浓度(IC50)作用24h的分别为:32.10±1.84、168.39±3.24、100±2+4.81、49.05±1.91、24.35±2.76μg/ml;新型金属铜络合物对SKOV3、Hela、MCF7、EC9706、A549的半数抑制浓度(IC50)作用48h的分别为:19.65±3.04、15.7±0.14、82.35±3.04、33.2±1.98、21.65±2.62μg/ml。2.体内抗肿瘤活性:新型金属铜络合物对S180腹水瘤模型小鼠的肿瘤具有一定抑制作用。能减小S180腹水模型小鼠的腹围和减少瘤体积;延长S180腹水模型小鼠的生存期;对小鼠脏器无影响,病理切片显示出治疗组小鼠的肝有明显好转。3.抗肿瘤的作用机制研究（1）周期实验结果显示:经不同浓度的新型金属铜络合物溶液（10.00-100.00μg/ml）作用细胞48小时后,Hela细胞的S期细胞的比例显著下降,G0/G1期细胞的比例明显增加,且G0/G1期细胞数具有一定的浓度效应关系,说明新型金属铜络合物溶液将Hela细胞分裂阻滞于G0/G1期,最终导致细胞的凋亡。（2）凋亡实验结果显示:不同浓度的新型金属铜络合物溶液（10.00-100.00μg/ml）作用细胞24、48h后,Hela细胞的形态发生了明显变化。未加药组的细胞核均一、结构完整;给药组细胞随着给药浓度的增大分别出现了:细胞体积缩小、变圆、脱落、破碎等现象。流式结果显示,Hela细胞出现了明显的凋亡。浓度为10.00、50.00、100.00μg/ml时,凋亡率比例分别为3.19、11.01、24.10%。（3）与Ct DNA作用的实验结果显示:在新型金属铜络合物的作用下,小牛胸腺DNA（Ct DNA）的紫外光谱出现了减色效应和明显的红移现象。DNA-EB体系的荧光光谱产生了荧光强度降低的现象。热变性实验结果表明,DNA的Tm略有升高。电泳的试验结果显示,新型金属铜络合物可以切割超螺旋质粒DNA。由实验结果显示,新型金属铜络合物的抗肿瘤作用机制可能是与DNA结合并造成其的损伤有关。结论:新型金属铜络合物对5株人肿瘤细胞均具有较强的抑制作用,体内生物学活性较好;其细胞周期结果显示其通过阻滞Hela细胞于G0/G1期而产生抑制作用;流式细胞仪测定结果显示明显的凋亡,凋亡率较高;与光谱学和电泳实验结果一致。说明新型金属铜络合物是一种具有良好开发前景的抗肿瘤药物。

全文目录


摘要  3-5
ABSTRACT  5-10
第一章 绪论  10-14
  1. 研究的目的与意义  10-11
  2. 国内外研究现状  11-12
  3. 本研究的创新之处  12
  4. 结论与展望  12-13
  参考文献  13-14
第二章 新型金属铜络合物的体外抗肿瘤作用  14-29
  1 引言  14-15
  2 仪器与试剂  15-16
    2.1 仪器  15
    2.2 试剂  15
    2.3 细胞株  15-16
  3 实验方法  16-18
    3.1 试剂的配制  16
    3.2 细胞的培养  16
    3.3 制备细胞悬液  16-17
    3.4 MTT法  17
    3.5 新型金属铜络合物对细胞形态的影响  17
    3.6 新型金属铜络合物对肿瘤细胞周期影响的测定  17
    3.7 新型金属铜络合物对肿瘤细胞凋亡影响的测定  17-18
  4 结果与讨论  18-27
    4.1 MTT的实验结果  18-22
      4.1.1 抑制率  18-21
      4.1.2 新型金属铜络合物对不同肿瘤细胞的IC_(50)  21-22
    4.2 新型金属铜络合物对Hela细胞形态的影响  22-24
    4.3 新型金属铜络合物对Hela细胞周期的影响  24-26
    4.4 新型金属铜络合物对Hela细胞凋亡的影响  26-27
  5 本章小结  27-28
  参考文献  28-29
第三章 体内抗肿瘤试验  29-39
  1 引言  29
  2 仪器与试剂  29-30
    2.1 仪器  29
    2.2 试剂  29
    2.3 动物  29
    2.4 瘤株  29
    2.5 实验环境  29-30
  3 实验方法  30-31
    3.1 建立稳定的S180小鼠腹水瘤模型  30
    3.2 接种  30
    3.3 分组  30
    3.4 给药  30
    3.5 检测指标  30-31
      3.5.1 新型金属铜络合物对荷瘤小鼠体重的影响  30
      3.5.2 新型金属铜络合物对荷瘤小鼠腹围的影响  30-31
      3.5.3 新型金属铜络合物对荷瘤小鼠腹水体积的影响  31
      3.5.4 新型金属铜络合物对荷瘤小鼠生存期的影响  31
      3.5.5 新型金属铜络合物对荷瘤小鼠脏器的影响  31
    3.6 统计学处理  31
  4 结果与讨论  31-38
    4.1 剂量选择的结果  31
    4.2 一般情况  31
    4.3 体重  31-32
    4.4 腹围  32-33
    4.5 腹水形成  33-34
    4.6 生存时间  34
    4.7 对心、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏等主要脏器的影响  34-37
    4.8 病理组织学观察  37-38
  5 本章小结  38
  参考文献  38-39
第四章 新型金属铜络合物与DNA的相互作用研究  39-53
  1 引言  39
  2 仪器与试剂  39-40
    2.1 仪器  39-40
    2.2 试剂  40
    2.3 试剂配制  40
  3 实验方法  40-42
    3.1 紫外吸收光谱法  40-41
    3.2 荧光光谱法  41
    3.3 热变性  41
    3.4 粘度  41-42
    3.5 DNA的切割实验  42
      3.5.1 络合物浓度的影响  42
      3.5.2 反应时间的影响  42
      3.5.3 反应pH值的影响  42
      3.5.4 盐离子浓度的影响  42
  4 结果与讨论  42-50
    4.1 紫外吸收光谱  42-44
    4.2 荧光光谱  44-46
    4.3 热变形结果  46-47
    4.4 粘度结果  47
    4.5 DNA的切割结果  47-50
      4.5.1 络合物浓度对切割的影响  47-48
      4.5.2 反应时间对切割的影响  48-49
      4.5.3 反应缓冲液(Tris-Hcl)pH值变化对切割的影响  49
      4.5.4 反应缓冲液(Tris-Hcl)中NaCl溶液浓度变化对切割的影响  49-50
  5 本章小结  50-51
  参考文献  51-53
第五章 结论与展望  53-54
综述金属络合物的抗肿瘤作用研究进展  54-64
  一、主族元素类金属络合物  54-55
    (1) IVA族锡(Sn)类金属络合物  54-55
    (2) IVA族锗(Ge)类金属络合物  55
  二、副族元素类金属络合物  55-58
    1、IB族  55-57
      (1) Cu类金属络合物  55-56
      (2) Au类金属络合物  56-57
    2、ⅢB族的稀上金属络合物  57
    3、IVB族的金属茂类络合物(Ti钛; VB族的V钒、Nb铌、Ta钽; VIB族的Mo钼、W钨)  57-58
  三、第八族元素类金属络合物  58-60
    1、铁(Fe)、钴(Co)、镍(Ni)类  58
    2、钌(Ru)、锗(Rh)、钯(Pd)类  58-59
    3、铂(Pt)类  59-60
  四、前景与展望  60-61
  参考文献  61-64
攻读硕士学位期间公开发表的论文  64-65
致谢  65

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中图分类: > 医药、卫生 > 药学 > 药理学
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