学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

枯草芽孢杆菌B-FS06对黄曲霉的抑制及活性物质的研究

作　者: 章挺
导　师: 程罗根；石志琦
学　校: 南京师范大学
专　业: 遗传学
关键词: 黄曲霉 枯草芽孢杆菌 抗菌蛋白 蛋白质纯化 surfactin bacillomycin D
分类号: S379.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
下　载: 510次
引　用: 6次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


黄曲霉是植物和人类共同的致病菌，其主要危害是侵染花生、玉米等粮食作物，在谷物贮藏过程中产生黄曲霉毒素。黄曲霉毒素具有诱导突变、抑制免疫和致癌作用，是导致肝癌的主要因素之一。中国是花生生产、消费和出口大国，黄曲霉污染给中国花生消费和出口造成很大损失。目前国内有关黄曲霉的研究主要集中在对黄曲霉毒素检测方法的改进，而对如何防治黄曲霉及控制毒素污染的报道很少。国外研究主要集中在对黄曲霉的生物防治，包括从植物或微生物中提取抗菌物质抑制黄曲霉生长或产毒，和利用其他微生物的竞争或拮抗作用抑制黄曲霉生长。尽管目前已经筛选到的抗黄曲霉化合物有很多，但真正能够投入实践中应用的却很少。黄曲霉污染给全球粮食造成巨大损失，迫切要求寻找有效控制黄曲霉污染的方法，而目前生物防治方法的研究是控制黄曲霉的热点。本实验室一直致力于采用微生物方法控制黄曲霉污染，已筛选到多株黄曲霉拮抗菌，本论文对其中拮抗活性最强的菌株B-FS06展开了研究，取得以下结果：(1)从B-FS06的培养特征、形态特征、生理生化特征和16S rDNA序列分析等方面对该细菌进行鉴定，确定其为枯草芽孢杆菌；(2)抑菌实验表明B-FS06发酵液有广谱抑制真菌活性，对黄曲霉菌丝生长和孢子萌发有显著抑制作用，且不会受到温度和酸碱度影响，活性物质能用硫酸铵沉淀，对蛋白酶K、胃蛋白酶和PMSF不敏感，用微孔法测得蛋白粗提液对黄曲霉最低抑菌浓度为31.2μg／mL，用琼脂扩散法测得最低抑菌浓度为12.5μg／well。(3)活性物质经多步分离纯化，最后通过质谱检测，发现抗菌物质含有surfactin和bacillomycin D，参考前人研究结果，认为bacillomycin D在抑制黄曲霉中发挥作用，并且活性物质(200μg／g)在花生上能抑制黄曲霉生长。本论文从黄曲霉拮抗菌B-FS06中纯化到活性物质bacillomycin D，首次研究该物质对黄曲霉孢子萌发的抑制，而黄曲霉主要依靠孢子进行繁殖和传播；同时首次利用微生物发酵产物在花生上低浓度控制黄曲霉生长，为在谷物贮藏过程中生物防治黄曲霉提供理论基础。

全文目录


摘要  6-7
Abstract  7-9
前言  9-11
第一章 文献综述  11-24
  1 黄曲霉及危害  11-12
    1.1 黄曲霉  11-12
    1.2 黄曲霉对人类的危害  12
  2 黄曲霉产生的毒素及危害  12-17
    2.1 黄曲霉毒素  12-16
      2.1.1 黄曲霉毒素合成途径  13-15
      2.1.2 黄曲霉毒素的危害  15
      2.1.3 黄曲霉毒素的检测  15-16
    2.2 其他毒素及危害  16-17
  3 黄曲霉在我国造成损失状况  17-18
  4 黄曲霉的控制  18-24
    4.1 植物源抗菌物质防治黄曲霉  18-19
    4.2 微生物及微生物源抗菌物质防治黄曲霉  19-20
    4.3 枯草芽孢杆菌防治黄曲霉  20
    4.4 枯草芽孢杆菌分泌的抗菌物质  20-23
      4.4.1 非核糖体途径合成抗菌物质  21-22
      4.4.2 核糖体途径合成的抗菌物质  22-23
        4.4.2.1 细菌素  22
        4.4.2.2 细胞壁降解酶  22-23
        4.4.2.3 其它抗菌物质  23
    4.5 生物防治黄曲霉存在的问题及本研究的意义  23-24
第二章 拮抗菌B-FS06的鉴定  24-35
  1 材料与方法  24-29
    1.1 培养基  24-25
    1.2 供试菌株  25
    1.3 B-FS06对黄曲霉的拮抗作用  25
    1.4 拮抗菌B-FS06的常规鉴定  25-27
    1.5 拮抗菌B-FS06的显微结构观察  27
    1.6 16S rDNA鉴定  27-29
      1.6.1 细菌总DNA的提取  27-28
      1.6.2 16S rDNA的扩增和片段的回收  28
      1.6.3 16S rDNA的克隆  28-29
      1.6.4 16S rDNA序列的测定及分析  29
  2 结果与分析  29-33
    2.1 拮抗菌B-FS06对黄曲霉的拮抗活性  29-30
    2.2 拮抗菌B-FS06的常规鉴定  30
    2.3 显微结构观察  30-31
    2.4 分子生物学鉴定  31-33
      2.4.1 16S rDNA测序  31-32
      2.4.2 菌株B-FS06进化树分析  32-33
  3 讨论  33-35
第三章 抗菌物质的抑菌研究  35-45
  1 材料与方法  35-39
    1.1 培养基及供试菌  35
    1.2 粗提液制备和蛋白浓度测定  35-36
      1.2.1 不同培养时间B-FS06发酵液的抑菌测定  35-36
      1.2.2 蛋白粗提液制备  36
      1.2.3 蛋白含量测定  36
    1.3 黄曲霉孢子制备  36
    1.4 蛋白粗提液抑菌测定  36-38
      1.4.1 蛋白粗提液抑菌谱测定  36-37
      1.4.2 蛋白粗提液对黄曲霉菌丝生长量的影响  37
      1.4.3 蛋白粗提液对黄曲霉孢子萌发的影响  37
      1.4.4 对黄曲霉最低抑菌浓度测定  37-38
        1.4.4.1 微孔法测定最低抑菌浓度  37-38
        1.4.4.2 琼脂扩散法测定最低抑菌浓度  38
    1.5 蛋白粗提液性质初步测定  38-39
      1.5.1 硫酸铵分级沉淀及抑菌实验  38
      1.5.2 蛋白粗提液温度敏感性实验  38
      1.5.3 蛋白粗提液酸碱敏感性实验  38-39
      1.5.4 蛋白粗提液对酶或酶抑制剂的敏感性测定  39
  2 结果与分析  39-44
    2.1 培养时间对B-FS06抑菌活性的影响  39
    2.2 蛋白粗提液对一些植物病原真菌的抑制作用  39-40
    2.3 对黄曲霉菌丝生长量和孢子萌发的抑制  40-41
    2.4 MIC  41-43
      2.4.1 微孔法  41-42
      2.4.2 琼脂扩散法  42-43
    2.5 蛋白粗提液的部分特性  43-44
      2.5.1 不同硫酸铵饱和度沉淀抑菌比较  43
      2.5.2 蛋白粗提液温度敏感性  43
      2.5.3 蛋白粗提液对酸碱敏感性  43
      2.5.4 蛋白粗提液对酶或酶抑制剂的敏感性  43-44
  3 讨论  44-45
第四章 活性物质的纯化及鉴定  45-57
  1 材料与方法  45-50
    1.1 培养基及供试菌  45
    1.2 蛋白粗提液制备  45-46
      1.2.1 发酵液制备  45
      1.2.2 硫酸铵沉淀  45
      1.2.3 浓盐酸沉淀  45-46
    1.3 凝胶层析分离  46-47
      1.3.1 蛋白液浓缩  46
      1.3.2 脱盐  46
      1.3.3 离子交换层析  46
      1.3.4 分子筛层析  46-47
    1.4 凝胶电泳检测  47-49
      1.4.1 不连续体系SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)  47-48
      1.4.2 Tricine-SDS-PAGE  48-49
    1.5 反相高效液相色谱(HPLC)检测  49
    1.6 质谱(mass spectrometry,MS)分析  49
    1.7 抗菌蛋白活体对黄曲霉生长的抑制  49-50
  2 结果与分析  50-55
    2.1 蛋白粗提液制备  50
    2.2 凝胶层析结果  50-52
      2.2.1 脱盐  50-51
      2.2.2 阴离子层析  51
      2.2.3 分子筛层析  51-52
    2.4 凝胶电泳  52
    2.5 HPLC  52-53
    2.6 ESI-MS  53-54
    2.7 蛋白液的活体抑菌  54-55
  3 讨论  55-57
全文总结  57-58
参考文献:  58-68
致谢  68-69
硕士期间发表论文  69

相似论文

  1. 海藻糖改善枯草芽孢杆菌电转化方法的研究,Q78
  2. 腐生葡萄球菌M36耐有机溶剂脂肪酶基因的克隆与表达,Q78
  3. 产γ-聚谷氨酸菌株的筛选及其生物有机肥的生物效应研究,TQ922.1
  4. Bacillus subtilis SQR9的黄瓜促生和枯萎病生防效果及其作用机制研究,S436.421
  5. Bacillus subtilis fmbj对桃软腐病菌Rhizopus stolonifer拮抗机理及应用研究,S476
  6. 伏马菌素B1和黄曲霉毒素B1联合诱导Vero细胞凋亡的研究,S856.9
  7. 黄曲霉毒素B1和脱氧雪腐镰刀菌烯醇诱导锦鲤原代肝细胞凋亡机制的初步研究,S856.9
  8. Bacillus subtilis fmbJ抗菌脂肽对Rhizopus stolonifer作用机理研究,TS255.1
  9. 枯草芽孢杆菌对基质栽培黄瓜盐胁迫伤害的缓解效应,S642.2
  10. 黄曲霉毒素B1对犬免疫机能的影响,S858.292
  11. 根霉中β-葡萄糖苷酶基因克隆及表达,Q78
  12. γ-PGA酸水解测定法的改进及发酵产γ-PGA过程分子量分布和水解酶基因克隆的研究,TQ920.1
  13. 基于改进的ID3算法的蛋白质纯化方法研究,Q51
  14. 基于数据挖掘的蛋白质纯化系统研究,TP311.13
  15. 产核黄素枯草芽孢杆菌代谢物组的初步研究,Q936
  16. 枯草杆菌Zj016发酵产氨肽酶的研究,TQ929
  17. 以麦糟为原料生物法制备嗜热β-葡聚糖酶技术的研究,TQ925
  18. 葡萄糖转化异丁醇代谢途径的设计与表达,TQ923
  19. 微生物发酵玉米蛋白粉生产玉米肽的研究,TQ929
  20. 不同吸附剂对锦鲤饲喂霉变饲料的脱毒效果研究,S963
  21. DY5000快速检测农产品中有毒有害物质方法验证,S859.84

中图分类: > 农业科学 > 农学（农艺学） > 农产品收获、加工及贮藏 > 贮藏 > 防潮、防霉处理，防虫、防鼠、防火
© 2012 www.xueweilunwen.com