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猪繁殖与呼吸综合征病毒感染后免疫抑制与IgG Fc受体转录

作　者: 万博
导　师: 张改平
学　校: 河南农业大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒免疫抑制 Fc受体表达变化荧光定量PCR
分类号: S858.28
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 73次
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内容摘要

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome, PRRS )也称猪蓝耳病,是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome virus, PRRSV)引起的病毒性传染病,蓝耳病的主要特征是造成母猪流产和仔猪呼吸障碍。该病于1987年首次在美国发现,目前,已在我国广泛流行,成为我国重要猪病病原之一。研究表明,PRRSV感染后会严重影响猪体免疫系统,导致免疫抑制,从而使疫苗的免疫效果下降。Fc受体是体液免疫与细胞免疫中的纽带,活化型和抑制型Fc受体共同表达于免疫细胞表面,通过调控活化性和抑制性信号间的平衡发挥机体免疫调控作用。猪IgG Fc受体分为三类,分别是FcγRI、FcγRII和FcγIII,本课题组克隆了三类猪IgG Fc受体基因,其中FcγRII为抑制性受体, FcγRI和FcγRIII是活化性受体。抗原抗体复合物和免疫细胞表面的活化型受体的结合可以激活免疫效应细胞,从而诱发多种免疫学效应。PRRSV感染后细胞免疫水平和体液免疫的变化可能与Fc受体的表达变化有关。本研究采用PRRSV变异株HN07-1和经典株BJ-4对PRRSV阴性猪进行攻毒,分别于不同时期耳缘静脉采集外周血。用血常规方法检测了外周血各类白细胞在不同时期的变化动态。采用Real-time PCR的方法检测了不同毒株PRRSV攻毒后猪体不同类型的Fc受体在不同时期的转录动态。结果发现PRRSV攻毒后各类白细胞数量均出现显著下降,活化性受体FcγRI和FcγRIII均迅速下调,而抑制性Fc受体FcγRII感染后有轻微上调,同时,不同毒株之间免疫指标变化存在显著差异。这一结果表明PRRSV感染后机体能够迅速诱导产生高水平的特异性抗体,感染后活化性Fc受体的下调是导致亲细胞抗体和抗原抗体复合物不能激活免疫效应细胞活激活能力下降的主要原因,并可以引起细胞免疫功能降低。而且,与PRRSV典株BJ-4相比变异株HN07-1感染可以引起试验动物更为严重的免疫抑制。本研究对于揭示PRRSV感染引起的免疫抑制的分子机制有重要意义。

全文目录

中文摘要  6-7
ABSTRACT  7-9
第一章文献综述  9-20
  1 猪繁殖与呼吸综合征病毒免疫学研究进展  9-12
    1.1 PRRS 免疫抑制的研究进展  9-10
    1.2 免疫调节理论  10
    1.3 PRRSV 感染对巨噬细胞的影响  10-11
    1.4 PRRSV 感染对T 细胞的影响  11-12
    1.5 PRRSV 感染对B 细胞的影响  12
  2 PRRSV 免疫调节和免疫逃逸研究进展  12-13
    2.1 PRRSV 抑制IFN-α的产生  12-13
    2.2 PRRSV 诱导细胞因子IL-10  13
    2.3 PRRSV 毒力变异与分子遗传标记研究进展  13
  3 Fc 受体研究进展  13-17
    3.1 Fc 受体家族  14-15
    3.2 活化性Fc 受体对先天性免疫细胞的影响  15-16
    3.3 抑制性受体FcγRIIB 的调节作用  16-17
  4 Real-time PCR 在细胞因子检测中的应用  17-19
    4.1 荧光嵌合法  18
    4.2 Taq Man 探针法  18
    4.3 定量方法  18-19
  5 本研究的意义  19-20
第二章 PRRSV 不同毒株感染对猪体免疫系统的影响  20-30
  1 前言  20
  2 材料  20-24
    2.1 病毒  20
    2.2 细胞  20
    2.3 酶、主要试剂  20-22
    2.4 主要仪器  22-23
    2.5 质粒、酶  23-24
    2.6 主要试剂盒  24
  3 方法  24
    3.1 试验动物及分组  24
    3.2 病毒接种  24
    3.3 外周血免疫细胞检测  24
    3.4 体温检测及剖检  24
    3.5 PRRSV 特异抗体检测  24
  4 结果  24-28
    4.1 不同毒株PRRSV 感染后猪外周血免疫细胞含量  24-27
    4.2 PRRSV 特异血清抗体检测结果  27
    4.3 体温变化、症状及病理变化  27-28
  5 讨论  28-30
第三章 PRRSV感染对FcγRs mRNA转录水平的影响  30-48
  1 前言  30-31
  2 材料  31-32
    2.1 病毒和细胞  31
    2.2 主要试剂  31-32
  3 方法  32-36
    3.1 试验动物及分组  32
    3.2 试验动物感染  32
    3.3 猪外周血白细胞分离  32
    3.4 mRNA 的提取及 cDNA 的合成  32-33
    3.5 引物的设计  33
    3.6 目标基因重组质粒的构建  33-35
    3.7 猪FcγRs 及GAPDH 荧光定量PCR 方法的建立  35
    3.8 Real-time PCR 扩增不同时期猪外周血白细胞FcγRs 及GAPDH  35-36
    3.9 数据分析  36
  4 结果  36-46
    4.1 猪外周血白细胞FcγRs 片段的扩增  36
    4.2 PCR 条件优化  36-37
    4.3 FcγRI 转录动态  37-40
    4.4 FcγRII 转录动态  40-43
    4.5 FcγRIII 转录动态  43-46
  5 讨论  46-48
全文结论  48-49
参考文献  49-57
致谢  57-58
附录  58
  参加的科研项目  58
  硕士期间发表的论文  58

猪繁殖与呼吸综合征病毒感染后免疫抑制与IgG Fc受体转录

内容摘要

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