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人参花酸性多糖GFLA-1的纯化及其分析

作　者: 韩丹
导　师: 周义发
学　校: 东北师范大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 人参花多糖 分离纯化 阿拉伯半乳聚糖 HG型果胶 RG型果胶
分类号: S567.51
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 26次
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内容摘要


本实验室的前期工作对人参花总多糖进行了提取分离,并对其部分级分进行了结构鉴定及活性研究。在此基础上,本文对人参花酸性糖级分GFLA-1进行制备,将其进一步分离纯化,同时研究了各级分的理化性质、单糖组成及结构特征。干燥的人参花经过热水煮提、乙醇醇沉精制得到人参花水溶性粗多糖GFL(79.1 g)。高效液相色谱法分析GFL的单糖组成,其单糖摩尔比为Man:Rha:GlcA:GalA:Glc:Gal:Xyl:Ara=3.1:2.2:0.9:16.0:8.2:52.3:1.5:10.8。GFL经过DEAE-Cellulose柱层析分级,得到一个中性糖级分GFLN和四个酸性糖级分GFLA-1、GFLA-2、GFLA-3、GFLA-4,并将这五个级分与实验室之前研究得到的样品进行了含量、单糖组成以及分子量的比较分析。因之前的工作未对GFLA-1深入研究,故本论文将GFLA-1经Sepharose CL-6B柱层析作进一步分级,得到分子量不同的两个级分GFLA-1-A和GFLA-1-B。GFLA-1-A经过高效凝胶渗透色谱和Sepharose CL-6B分析显示呈单一对称的峰,分子量约为9.1×104 Da。高效液相色谱法分析其单糖组成成分,结果显示GFLA-1-A主要由半乳糖和阿拉伯糖组成,含量分别为58.3%和34.4%,比例接近2:1,且两者之和占总含量的90%。另外,还含有少量的鼠李糖(4.4%)、半乳糖醛酸(2.3%)和甘露糖(0.6%)。成分中阿拉伯糖与半乳糖构成阿拉伯半乳聚糖结构域,同时因为有少量鼠李糖和半乳糖醛酸的存在并且比例接近,推测GFLA-1-A是一种AG型中性多糖,并含有RG型侧链。GFLA-1-B经高效凝胶渗透色谱及Sepharose CL-6B分析同样呈现出单一窄峰,总糖和糖醛酸峰均表现出较好的对称性,分子量分布较集中,约为4.7×103 Da。GFLA-1-B的单糖组成比较复杂,所含单糖种类比较繁多。其最主要的单糖为半乳糖,含量高达35.6%。再者,半乳糖醛酸也是主要的单糖,含量占总含量的27.3%。除以上两者单糖外,阿拉伯糖占总糖的17.9%。这三种单糖含量达到GFLA-1-B总糖的80%,另外还有鼠李糖(5.8%)、葡萄糖醛酸(4.9%)、葡萄糖(4.5%)和甘露糖(3.0%)。其中,半乳糖:阿拉伯糖约为2:1,推测其中同时含有阿拉伯半乳聚糖和聚半乳糖结构域。又由于少量鼠李糖和半乳糖醛酸的存在,推测其中应含有少量RG型侧链。

全文目录


摘要  4-5
Abstract  5-7
目录  7-9
第一章 前言  9-23
  1.1 糖类的研究概况  9-11
    1.1.1 糖类的研究历史  9-10
    1.1.2 多糖的概念及分类  10
    1.1.3 多糖的结构  10-11
  1.2 植物多糖的研究概况  11-16
    1.2.1 植物多糖的分离纯化及结构研究  11-13
    1.2.2 植物多糖的生物活性研究  13-16
  1.3 人参多糖的研究概况  16-21
    1.3.1 人参根多糖的研究  17-18
    1.3.2 人参叶多糖的研究  18-20
    1.3.3 人参果多糖的研究  20-21
    1.3.4 人参花的研究进展  21
  1.4 选题依据  21-23
第二章 结果与讨论  23-37
  2.1 人参花多糖GFL 的制备  23-26
    2.1.1 提取分离  23
    2.1.2 苯酚—硫酸法测得糖含量标准曲线  23-24
    2.1.3 间羟基联苯法测得糖醛酸含量标准曲线  24
    2.1.4 GFL 的单糖组成分析  24-25
    2.1.5 GFL 的分子量分布  25-26
    2.1.6 小结与讨论  26
  2.2 GFLA-1 的制备  26-28
    2.2.1 GFL 分级制备GFLA-1  26-27
    2.2.2 GFLA-1 的研究  27-28
  2.3 GFLA-1 的分级  28-29
  2.4 GFLA-1-A 的研究  29-32
    2.4.1 苯酚硫酸法测GFLA-1-A 糖含量的标准曲线  29
    2.4.2 间羟基联苯法测GFLA-1-A 糖醛酸含量的标准曲线  29-30
    2.4.3 GFLA-1-A 单糖组成  30-31
    2.4.4 GFLA-1-A 的凝胶柱层析分析  31
    2.4.5 HPGP 检测GFLA-1-A 的纯度  31-32
  2.5 GFLA-1-B 的研究  32-35
    2.5.1 苯酚硫酸法测GFLA-1-B 糖含量的标准曲线  32
    2.5.2 间羟基联苯法测GFLA-1-B 糖醛酸含量的标准曲线  32-33
    2.5.3 GFLA-1-B 的单糖组成  33-34
    2.5.4 GFLA-1-B 的凝胶柱层析分析  34
    2.5.5 HPGPC 鉴定GFLA-1-B 的纯度  34-35
  2.6 结果与讨论  35-37
第三章 实验方法  37-44
  3.1 实验材料及设备  37-38
    3.1.1 实验材料  37
    3.1.2 实验设备  37-38
    3.1.3 实验仪器  38
  3.2 实验过程及方法  38-40
    3.2.1 人参花多糖的提取分离  38
    3.2.2 人参花多糖的分级纯化  38-40
  3.3 一般方法  40
    3.3.1 常规干燥  40
    3.3.2 冷冻干燥  40
    3.3.3 透析  40
  3.4 多糖的分离纯化方法  40-41
    3.4.1 离子交换柱层析  40-41
    3.4.2 凝胶柱层析  41
  3.5 多糖的分析方法  41-44
    3.5.1 总糖含量测定  41
    3.5.2 糖醛酸含量的测定  41-42
    3.5.3 单糖组成的测定  42
    3.5.4 多糖的HPGPC 分析方法  42-44
参考文献  44-48
致谢  48

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中图分类: > 农业科学 > 农作物 > 经济作物 > 药用作物 > 喜阴药物 > 人参
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