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无公害畜产品微生物快速检测方法的研究

作　者: 刘金娥
导　师: 杜斌
学　校: 郑州大学
专　业: 药物分析
关键词: 畜产品沙门氏菌大肠菌群快速检测测试片法试剂盒法 PCR
分类号: TS251.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

随着人们生活水平的不断提高,畜产品在人们饮食结构中所占的比例越来越大,畜产品质量的安全问题已经成为人们广泛关注的重大问题。食源性致病菌是影响畜产品安全的主要原因之一,检测食源性致病菌是保障畜产品质量安全的关键环节,因此研究畜产品中微生物的检测方法即成为极其重要的一个课题。就全球而言,沙门氏菌和大肠菌群是引起细菌性食物中毒的主要原因,而传统的沙门氏菌和大肠菌群检测,操作繁琐,费时费力,难以应对食物中毒的快速诊断和对畜产品安全的实时监控。本论文对畜产品沙门氏菌和大肠菌群的快速检测方法做了一些研究,全文共分为四个部分。第一部分综述了当前我国畜产品的质量安全现状,以及当前沙门氏菌及大肠菌群检测方法的研究进展。第二部分对无公害畜产品中大肠菌群的检测方法进行了研究,对测试片法检测大肠菌群进行了特异性和重复性试验,并将国标法及测试片法用于大肠菌群的检测进行了比较,试验结果表明PetrifilmTM大肠菌群测试片用于测定无公害畜产品中大肠菌群可省却繁重的准备、收尾工作,操作简单,快速省时,检测结果与国标法相符,可用于无公害畜产品中大肠菌群的测定。第三部分对沙门氏菌快速检测试剂盒的应用效果进行了评价,用多种沙门氏菌株考察了试剂盒的准确度、检测限、特异性,并通过对90份生鲜鸡肉和90份生鲜猪肉试剂盒法与国标法检验比较考察了试剂盒的应用效果,结果表明对沙门氏菌检测的检测限可达到1 cfu/25g样品,所考察的非沙门氏菌检测沙门氏菌快速检测试剂盒的特异度为100%,通过共计180份样品用国标法和试剂盒法进行比对实验,分析得出该试剂盒的灵敏度为99.3%。第四部分建立了沙门氏菌PCR快速检测体系。研究了5种增菌液对PCR反应的影响,确定了SC增菌液为培养沙门氏菌的最佳增菌液；确定了特异性强的上下游引物对；对沙门氏菌PCR检测方法的特异性、灵敏度及重复性进行了研究,试验结果表明建立的沙门氏菌PCR检测简便快速、特异性强、灵敏度高、重复性好,本研究确定的沙门氏菌PCR检测方法将会有广泛的应用。

全文目录

摘要  3-5
Abstract  5-9
第一章无公害畜产品中微生物快速检测技术研究进展  9-19
  1. 我国畜产品质量安全现状  9-11
  2. 微生物安全问题  11-12
    2.1 病原微生物的污染  11
    2.2 人兽共患病安全问题  11
    2.3 生产加工环节安全问题  11-12
      2.3.1 畜产品宰杀环节安全问题  11-12
      2.3.2 肉制品加工存在的主要安全问题  12
  3. 无公害畜产品中微生物检测技术的研究进展  12-18
    3.1 大肠菌群检测技术的研究进展  12-14
      3.1.1 检测大肠菌群的传统方法  13
      3.1.2 检测大肠菌群的新方法  13-14
    3.2 沙门氏菌检测技术的研究进展  14-18
  4. 开展无公害畜产品中微生物快速检测技术研究的意义  18-19
第二章无公害畜产品中大肠菌群快速检测方法的研究  19-39
  1 材料与方法  19-22
    1.1 仪器  19-20
    1.2 材料  20
    1.3 方法  20-22
      1.3.1 特异性实验  20
      1.3.2 重复性实验  20-21
      1.3.3 国标法和Petrifilm~(TM)测试片法比较  21-22
  2 试验结果  22-35
    2.1 特异性实验  22-23
    2.2 重复性实验  23-24
    2.3 国标法和Petrifilm~(TM)测试片法比较  24-35
  3 讨论  35-39
第三章无公害畜产品中沙门氏菌的快速检测方法的研究-试剂盒法  39-48
  1 材料与方法  40-44
    1.1 材料  40-41
      1.1.1 试验用样品  40
      1.1.2 试验用菌株  40
      1.1.3 试剂和培养基  40-41
      1.1.4 仪器  41
    1.2 方法  41-44
      1.2.1 准确度试验  41
      1.2.2 检测限试验  41-43
      1.2.3 特异性试验  43
      1.2.4 试剂盒法与国标法比较  43-44
  2 结果  44-46
    2.1 沙门氏菌快速检测试剂盒准确度测定结果  44
    2.2 与国标法比较用沙门氏菌试剂盒进行检测限试验结果  44-45
    2.3 沙门氏菌快速检测试剂盒特异性试验结果  45-46
    2.4 沙门氏菌快速检测试剂盒的灵敏度和特异度测定结果  46
  3 讨论  46-48
第四章无公害畜产品中沙门氏菌的快速检测方法的研究-PCR法  48-55
  1 材料与方法  48-51
    1.1 实验菌株  48-49
    1.2 主要试剂和仪器  49
      1.2.1 主要试剂  49
      1.2.2 主要仪器  49
    1.3 方法  49-51
      1.3.1 菌体总DNA模板提取方法比较  49-50
      1.3.2 沙门氏菌PCR引物的设计  50
      1.3.3 适宜增菌液的选择  50
      1.3.4 PCR检测方法特异性试验  50-51
      1.3.5 PCR检测方法的灵敏度试验  51
      1.3.6 PCR检测方法的重复性试验  51
  2 结果与分析  51-54
    2.1 菌体模板提取方法比较  51
    2.2 适宜增菌液的选择  51-52
    2.3 沙门氏菌PCR检测方法的特异性试验结果  52-53
    2.4 沙门氏菌PCR检测方法的灵敏度试验结果  53
    2.5 沙门氏菌PCR检测方法的重复性试验结果  53-54
  3 结果与讨论  54-55
全文总结  55-57
参考文献  57-61
攻读硕士期间发表的文章  61-62
致谢  62

无公害畜产品微生物快速检测方法的研究

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