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大鼠Myostatin蛋白的抗体制备及其应用

作　者: 黄丽
导　师: 顾晓松
学　校: 南通大学
专　业: 神经生物学
关键词: myostatin 抗体胫神经夹伤 Western blot immunohistochemistry
分类号: Q789
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 40次
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内容摘要

目的利用谷胱甘肽S-转移酶(GST)融合系统在大肠杆菌中表达纯化大鼠myostatin蛋白,采用GST-myostatin融合蛋白进行多克隆抗体的制备、鉴定并进一步阐明胫神经损伤后腓肠肌肌萎缩过程中myostatin蛋白表达变化。方法用IPTG诱导含已构建的pGEX-4T-myostatin质粒的大肠杆菌BL21表达GST-myostatin蛋白,采用Western-blot用抗- GST抗体验证融合蛋白表达,用电洗脱法纯化蛋白。将纯化好的GST-myostatin融合蛋白免疫家兔,获得抗血清,经Western-blot、免疫组织化学及ELISA检测抗体特异性及效价;建立大鼠胫神经夹伤模型,采用RT-PCR、Western-blot及免疫组织化学法检测胫神经夹伤后不同时间段腓肠肌中myostatin基因及蛋白表达变化。结果得到较高纯度的GST-myostatin融合蛋白,获得兔源的抗myostatin血清,经Western-blot、免疫组织化学及ELISA实验显示所得抗体具有较高的特异性及效价;发现在胫神经夹伤后,腓肠肌myostatin基因及蛋白水平迅速上升,在第14天达到高峰,随后逐渐下降,至第28天降至接近正常水平。结论成功获得GST-myostatin融合蛋白,成功制备了兔抗大鼠myostatin抗血清,进一步检测表明了胫神经损伤后腓肠肌中myostatin蛋白的表达具有时间依赖性。本研究为探讨myostatin在骨骼肌萎缩过程中的作用提供了实验基础。

全文目录

英文缩略词表(Abbreviation)  6-9
中文摘要(Abstract in Chinese)  9-10
英文摘要(Abstract in English)  10-11
前言(Introduction)  11-12
第一部分  12-29
  材料和方法(Material and Method)  12-20
  结果(Results)  20-29
第二部分  29-37
  材料和方法(Material and Method)  29-33
  结果(Results)  33-37
讨论(Discussion)  37-39
结论(Conclusion)  39-40
参考文献(References)  40-43
综述(Review)  43-51
综述参考文献(References)  51-57
已发表文章(Published Articles)  57-58
致谢(Acknowledgements)  58

大鼠Myostatin蛋白的抗体制备及其应用

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