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醋酸棉酚对猪原代培养黄体细胞凋亡影响的研究

作　者: 龙安梅
导　师: 袁慧
学　校: 湖南农业大学
专　业: 临床兽医
关键词: 醋酸棉酚猪原代培养黄体细胞细胞凋亡胶原酶 MTT TUNEL DNA Ladder
分类号: S828.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
下　载: 94次
引　用: 3次
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内容摘要

我国是一个产棉大国，棉籽饼粕资源丰富，营养价值高，且价格低廉，日益成为饲料中植物蛋白的重要来源。但棉酚是棉籽饼粕中的主要有毒成分，棉酚的雄性抗生育作用早己被证实，而棉酚对雌性的繁殖毒性作用研究较少，观点不一。为探讨棉酚对母畜的繁殖毒性作用，合理开发利用棉籽饼粕作为畜禽配合饲料，进行了本试验。试验采用长大杂母猪原代培养黄体细胞为模型，通过MTT法、DNA Ladder检测和TUNEL法，初步探讨0、0.4、2、10、50μg／mL醋酸棉酚对猪原代培养黄体细胞的凋亡影响以及毒性作用。用机械分离和0.2％胶原酶Ⅱ消化相结合的方法分离黄体细胞，0.4％台盼兰拒染试验显示其活率在90％以上。猪原代培养黄体细胞生长良好，预培养24h进行试验，满足试验要求。MTT检测结果表明：5％乙醇溶剂对照组与0μg／mL组比较，无差异性(P＞0.05)，说明5％乙醇对猪原代培养黄体细胞的影响可以忽略。处理24h，0.4μg／mL浓度组与溶剂对照组比较，差异显著(P＜0.05)，其它各浓度组差异极显著(P＜0.01)；处理48h，各浓度组与溶剂对照组比较，差异均极显著。两时间段同水平间比较，10μg／mL和50μg／mL组差异极显著；48h两浓度组黄体细胞抑制率分别达60％和70％。琼脂糖凝胶电泳各组均未检测到DNA Ladder。TUNEL检测结果表明：各剂量组均有黄体细胞凋亡，凋亡率5％～23％，随着醋酸棉酚浓度的增加细胞凋亡率也增加。24h和48h各剂量组与溶剂对照组相比，差异均极显著。两时间段同水平间比较，0.4μg／mL和2μg／mL组无差异性；10μg／mL和50μg／mL组差异极显著。猪原代培养黄体细胞试验模型的成功应用，为体外研究黄体的相关试验提供了方法借鉴。醋酸棉酚在低、高剂量下均能抑制猪原代培养黄体细胞的增殖和诱导其凋亡。低剂量下主要通过诱导黄体细胞凋亡，从而抑制细胞增殖；高剂量下除诱导细胞凋亡外，主要对细胞直接造成损伤，产生细胞毒性。这种作用呈剂量相关性；在一定剂量下，有时间依赖关系。鉴于棉酚在低剂量时能诱导黄体细胞凋亡，影响母畜繁殖功能，棉籽饼粕不宜作为母畜配合饲料。

全文目录

前言  7-21
1. 材料与方法  21-28
  1.1 供试材料  21
  1.2 主要仪器  21
  1.3 主要试剂  21-22
  1.4 试剂配制  22-24
  1.5 方法  24-27
    1.5.1 猪黄体细胞的分离和培养  24-25
    1.5.2 MTT法检测醋酸棉酚对猪黄体细胞增殖的抑制作用  25
    1.5.3 凝胶电泳检测DNA Ladder  25-26
    1.5.4 TUNEL法检测醋酸棉酚诱导猪黄体细胞的凋亡  26-27
  1.6 试验数据处理  27-28
2. 结果与分析  28-34
  2.1 猪黄体细胞的分离和培养  28-29
  2.2 醋酸棉酚对猪黄体细胞增殖的抑制作用  29-31
  2.3 DNA Ladder检测结果  31-32
  2.4 TUNEL检测结果  32-34
3. 讨论  34-39
  3.1 猪原代培养黄体细胞研究模型  34-36
    3.1.1 试验模型的应用  34
    3.1.2 猪黄体细胞分离和培养  34-36
  3.2 醋酸棉酚对猪原代培养黄体细胞的毒性作用  36-37
  3.3 醋酸棉酚对猪原代培养黄体细胞的调亡诱导作用  37-39
4. 结论  39-40
参考文献  40-45
缩写词  45-47
致谢  47-48
作者简历  48

醋酸棉酚对猪原代培养黄体细胞凋亡影响的研究

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