学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

人乳头瘤病毒58型晚期蛋白L1在大肠杆菌中的表达及纯化的研究

作　者: 耿星涛
导　师: 孔维；刘景晔
学　校: 吉林大学
专　业: 生物工程
关键词: 人乳头瘤病毒58型 L1基因原核表达纯化
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
下　载: 82次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

人乳头瘤病毒(Human Papil1omavirus, HPV)是一种引起人类皮肤、粘膜的乳头状瘤或疣,并可导致恶性病变的病原体。研究表明,90%宫颈癌的发生与人乳头瘤病毒感染有关。近年的流行病学研究显示,人乳头瘤病毒58型(HPV58)在中国妇女宫颈癌标本中检出阳性率非常高,尤其是东南省份,HPV58型的感染有上升趋势,与HPV16型的检出率相近,同时二者在宫颈各病变组的检出强度趋势基本一致。由此可见,在我国HPV58型是仅次于HPV16型的高危型别,与宫颈癌发生关系密切。目前,国内外对HPV 16型已做了大量工作,而对HPV58型的研究却较少。基于HPV58型在我国妇女宫颈癌中的特殊位置,本研究克隆并构建了HPV58 L1基因的重组表达载体,并利用原核细胞表达HPV58 L1主要衣壳蛋白,为研制HPV58型基因工程疫苗打下基础。

全文目录

前言  7-18
  1. HPV 的基因结构和功能  7-8
  2. HPV 的致癌机制  8-10
  3. HPV58 型感染的流行病学特点  10-12
  4. HPV 预防性疫苗的研究进展  12-18
第一章仪器和材料  18-20
第二章方法  20-31
  1. 病理组织DNA 的提取  20
  2. PCR 扩增HPV58 L1 基因片段  20-22
    2.1 引物设计与合成  20-21
    2.2 PCR 扩增L1 基因反应条件  21
    2.3 PCR 扩增L1 基因反应体系  21-22
    2.4 PCR 产物的纯化  22
  3. pGEM-T-L1 重组质粒的构建  22-23
    3.1 连接反应  22
    3.2 大肠杆菌JM109 感受态的制备(小量制备)  22-23
    3.3 转化大肠肝菌  23
    3.4 重组质粒小量提取与鉴定  23
  4. pRSET-B-L1 重组原核表达质粒的构建  23-26
    4.1 酶切目的基因与载体  23-24
    4.2 连接反应  24-25
    4.3 大肠杆菌感受态的制备  25
    4.4 转化细菌  25
    4.5 质粒pRSET-B-L1 的小量提取与鉴定  25-26
  5. 融合蛋白L1 的表达  26
  6. 表达产物的纯化  26-28
    6.1 样品纯化前的处理  26-27
    6.2 L1 蛋白的纯化  27-28
  7. 表达产物的鉴定  28-31
    7.1 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳  28-29
    7.2 蛋白印迹(Western blot)  29-31
第三章结果  31-38
  1. HPV58 L1 基因的克隆  31-35
    1.1 模板DNA 的获得  31-32
    1.2 HPV58 L1 基因PCR 扩增结果  32
    1.3 质粒pGEM-T-L1 测序结果  32-34
    1.4 pRSET B-L1 重组质粒酶切鉴定结果  34-35
  2. HPV58 L1 基因的表达  35-38
    2.1 重组表达产物的SDS-PAGE 鉴定结果  35
    2.2 SDS-PAGE 鉴定表达产物存在形式  35-36
    2.3 蛋白印迹(Western blot)鉴定结果  36-37
    2.4 L1 蛋白的纯化  37-38
第四章讨论  38-41
结论  41-42
参考文献  42-48
中文摘要  48-50
ABSTRACT  50-55
致谢  55-56
导师简介  56-57
作者简历  57

人乳头瘤病毒58型晚期蛋白L1在大肠杆菌中的表达及纯化的研究

内容摘要

全文目录

相似论文